【摘 要】
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运用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从家蝇体内扩增出抗菌肽天蚕素(cecropin)基因的开放阅读框(ORF),与pMD-18T载体重组,经限制性酶切片段分析和核苷酸序列分析,与GenBank
【机 构】
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中山大学生物防治国家重点实验室,华南农业大学动物科学学院,中山大学生物防治国家重点实验室
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运用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从家蝇体内扩增出抗菌肽天蚕素(cecropin)基因的开放阅读框(ORF),与pMD-18T载体重组,经限制性酶切片段分析和核苷酸序列分析,与GenBank中报道的序列一致.根据此ORF,重新合成1对引物,并在碳末端进行定点突变,加上Asn编码,使其末端酰氨化,再利用半嵌套式PCR扩增出家蝇cecropin基因的成熟肽,与双酶切的酵母表达载体pPICZαA连接,经PCR和双酶切鉴定,成功构建了分泌型表达质粒.
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