糖基转移酶Alg11作为N-糖基化途径中一个重要蛋白,功能为催化将甘露糖转移到底物DPGn₂M₃（Dolichyl-pyrophosphate-Glc NAc₂Mannose₃）上进而生成DPGn₂M₄和DPGn₂M₅这两种多萜醇寡糖前体的反应。在本研究中,首先通过对酿酒酵母Alg11的蛋白质结构进行分析,设计了去除跨膜域的蛋白Alg11_45-548并成功在大肠杆菌中表达,进而对诱导时间、诱导剂浓度进行了产量最大化的优化,最终得到了纯化蛋白。以PPGn₂（Phytanyl-pyrophosphate-Glc NAc₂）为底物,利用体外表达的重组蛋白Alg1ΔTM和Trx-Alg2以酶法合成出Alg11的天然底物类似物PPGn₂M₃。用纯化的Alg11_45-548蛋白催化转糖基反应,并通过液质联用（LC-MS）的方法检测产物,证实Alg11_45-548蛋白具有催化PPGn₂M₃生成PPGn₂M₄和PPGn₂M₅的糖基转移酶活性。产物PPGn₂M₅通过不同的甘露糖苷酶酶切反应,验证了两个新加上的甘露糖以α-1,2糖苷键的形式连接到底物PPGn₂M₃上。底物特异性实验表明Alg11_45-548可以特异性识别底物PPGn₂M₃,而其他N-糖基化中间体类似物如PPGn₂和PPGn₂M₁无法被识别,且底物中的脂肪链结构也对酶的识别具有重要作用。Alg11的底物特异性保证了多萜醇寡糖前体的有序合成,具有重要的生理意义。