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[背景]职业接触甲醇后可引起中枢神经系统损伤.有研究表明,在应激或毒性刺激下,钙激活蛋白酶(calpain)使p35蛋白转化为p25蛋白,激活钙依赖性蛋白激酶5(CDK5),p53蛋白积聚及磷酸化后出现神经细胞凋亡.甲醇是否可以激活calpain从而启动p25-CDK5-p53信号通路,通过经典线粒体途径使神经细胞凋亡,尚不明确.[目的]通过体外实验探究p25-CDK5-p53信号通路在甲醇致人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞)凋亡中的作用.[方法]采用不同浓度甲醇(0、250、750、1250 mmol/L,即对照、低、中、高浓度组)分别染毒SK-N-SH细胞24h后,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR技术检测calpain2、CDK5、p35、p25、p53 mRNA表达水平;Western blotting检测calpain2、CDK5、p25、p35、p53及p53磷酸化蛋白表达水平.[结果]对照组及甲醇低、中、高浓度组处理24h后细胞凋亡率分别为(8.15±1.77)％、(12.06±0.71)％、(13.81±0.67)％、(19.88±2.40)％,组间差异有统计学意义(F=29.05,P＜0.01).各浓度组calpain2、CDK5、p25、p53 mRNA相对表达水平差异均有统计学意义(F=10.02、61.48、28.91、21.12,P＜0.01),各浓度组p35 mRNA相对表达水平差异无统计学意义(F=0.96,P＞ 0.05).与对照组相比,甲醇低、中浓度组calpain2、CDK5、p25 mRNA相对表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05),甲醇中浓度组p53 mRNA相对表达水平升高(P＜0.01),高浓度组calpain2、CDK5、p25、p53 mRNA相对表达水平升高(P＜0.01).各浓度组calpain2、CDK5、p35、p25、p53磷酸化蛋白、p53蛋白相对表达水平差异具有统计学意义(F=32.29、17.60、35.02、35.92、93.72、11.00,P＜0.05).与对照组相比,低、中、高浓度组calpain2、CDK5、p35、p25、p53磷酸化蛋白相对表达水平升高(P＜0.05),中、高浓度组p53蛋白相对表达水平升高(P＜0.05),低浓度组p53蛋白相对表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]甲醇染毒后可使calpain2、p35、p25及CDK5蛋白表达水平增加,p53蛋白积聚及其磷酸化,和SK-N-SH神经细胞凋亡.