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目的：构建结核分枝杆菌融合基因esat6-rpfD的原核表达载体，表达和纯化ESAT6-RpfD融合蛋白。方法：从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中经PCR分别扩增esat6和慢周基因，克隆入pMD19-T载体，测序后克隆入原核表达载体pProExHTB，酶切重组质粒，转化大肠杆菌DH5α，IPTG诱导表达融合蛋白，亲和层析纯化融合蛋白。结果：PCR扩增的esat6、rpfD基因序列与GenBank报道一致；诱导表达后，经SDS-PAGE和Western blot分析，在相对分子质量约30000处有目的条带