灵芝LZ-8在烟草中的表达及产物特性的初步研究

来源 :分子植物育种 | 被引量 : 0次 | 上传用户:skyforce2008
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将从灵芝中克隆的LZ-8基因构建成原核表达质粒pET-30a-lz8,在大肠杆菌BL21中表达。SDS-PAGE表明其分子量约为14kD,与推算出的氨基酸分子量相似。经金属镍离子螯合柱纯化后的原核表达产物为单一条带,纯化产物免疫兔子获得了高效价的抗血清。将该基因亚克隆到植物双元表达载体中,用农杆菌介导的方法转化烟草。经ELISA实验定量测定,重组LZ-8达到了烟草可溶性蛋白的0.18%(每克新鲜叶片约含149.82μgLZ-8重组蛋白)。体外活性检测表明,重组蛋白能有效地提高VeroE6细胞中肿瘤坏死因子
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