抗体轻链可变区基因真核表达框架及抗CD3鼠/人嵌合轻链基因的构建

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fanshuyige
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利用抗乙肝表面抗原的单抗2H1的轻链可变区基因的一部分,以核酸定点突变法引入MluⅠ限制性内切酶识别位点,构建了含有启动子、前导肽序列以及剪接供体信号等真核表达元件和 "EcoRV-Mlu Ⅰ" 外显子克隆 "匣" 的通用的抗体轻链可变区基因真核表达框架pGEM-LPCR。从分泌CD3单抗的杂交瘤细胞中提取基因组DNA,通过PCR扩增及序列分析证实获得了CD3单抗轻链可变区基因的外显子。将其克隆到pGEM-LPCR中,切下完整的真核转录单位,与带有人Kappa链恒定区基因及选择标记基因的表达载体相连接,成功地构建了抗CD3鼠/人嵌合轻链基因。此表达框架可用于多种抗体轻链可变区基因外显子的克隆及其真核转录单位的制备,大大简化了基因工程抗体的研制。

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