抗内毒素类脂A单链抗体基因的克隆、表达和初步鉴定

来源 :中华整形外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guohaoyan
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为探索G杆菌脓毒症的治疗问题,应用基因工程技术从本所制备的分泌抗内毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取mRNA,然后反转录成cDNA第一链,用特异性轻、重链引物扩增反应产物,获得重链(340bp)和轻链(320bp)基因片段,经纯化后将轻链和重链基因用一多肽连接物连接,构成单链抗体基因片段。此单链抗体基因经再次PCR扩增后克隆入PCANTAB5噬菌粒中再转化于感受态的TG1大肠杆菌中,通过噬菌体抗体库技术筛选重组噬菌体,结果在TG1细菌中表达了9G6单链抗体基因。ELISA阻断试验初步证明了该单链抗体能阻断其亲本单克隆抗体对内毒素的结合。提示:抗内毒素单链抗体可为脓毒症的治疗提供一条途径。

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