探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSC)培养上清液(hAMSC－CS)对人Fb生物学功能的影响。

(1)取废弃胎盘新鲜羊膜组织，分离hAMSC，并进行传代培养。倒置相差显微镜下观察培养3 d及第3代hAMSC形态。(2)取2批次第3代hAMSC，免疫荧光染色法检测细胞波形蛋白表达，流式细胞仪检测细胞表面标志物CD90、CD73、CD105及CD45表达。(3)收集培养72 h的第3代hAMSC－CS，ELISA法检测其中胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF－Ⅰ)、血管内皮生长因子(VEGF)、EGF、bFGF的含量。(4)取包皮环切术后废弃包皮，分离人Fb，并进行传代培养。采用第3代人Fb进行以下实验。按随机数字表法(分组方法下同)将细胞分为空白对照组及10%、30%、50%、70%hAMSC－CS组，每组48孔。空白对照组用含体积分数2%FBS的DMEM/F12培养液培养，后4组分别用含相应体积分数hAMSC－CS和体积分数2%FBS的DMEM/F12培养液培养。培养12、24、48、72 h，采用细胞计数试剂盒8及酶标仪检测细胞增殖活性。选取使人Fb增殖活性最高的相应体积分数hAMSC－CS用于以下实验。(5)另取人Fb，分为空白对照组及50%hAMSC－CS组，同(4)处理，每组4孔。分别于划痕后0(即刻)、12、24、48、72 h，于倒置相差显微镜下观测细胞迁移距离。(6)另取人Fb，同(5)分组处理，每组3瓶，流式细胞仪检测细胞凋亡率。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、单因素方差分析、LSD检验、t检验。

(1)培养3 d，多数hAMSC形态较大，呈纺锤形多突起的Fb样或扁平多角形。第3代hAMSC呈梭形或纺锤形，波形蛋白表达呈强阳性，细胞表面标志物CD90、CD73、CD105表达阳性，CD45表达阴性。(2)hAMSC－CS中IGF－Ⅰ、VEGF、EGF、bFGF的含量分别为(11.7±1.0)、(316±68)、(6.1±0.4)、(1.49±0.05)pg/mL。(3)培养12～72 h，各hAMSC－CS组人Fb增殖活性明显高于空白对照组(P值均小于0.01)，50%hAMSC－CS组人Fb增殖活性最高。(4)划痕后0 h，2组人Fb划痕宽度几乎相同。划痕后12～72 h，50%hAMSC－CS组人Fb迁移距离明显长于空白对照组(P值均小于0.01)。(5)空白对照组人Fb凋亡率为(16.2±2.4)%，明显高于50%hAMSC－CS组的(7.4±3.6)%(t＝6.710，P<0.01)。

hAMSC－CS对人Fb的增殖和迁移具有促进作用，对人Fb的凋亡有抑制作用。