【摘 要】
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目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSC)培养上清液(hAMSC-CS)对人Fb生物学功能的影响。方法(1)取废弃胎盘新鲜羊膜组织,分离hAMSC,并进行传代培养。倒置相差显微镜下观察培养3 d及第3代hAMSC形态。(2)取2批次第3代hAMSC,免疫荧光染色法检测细胞波形蛋白表达,流式细胞仪检测细胞表面标志物CD90、CD73、CD105及CD45表达。(3)收集培养72 h的第3代hAMSC-
【机 构】
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目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSC)培养上清液(hAMSC-CS)对人Fb生物学功能的影响。
方法(1)取废弃胎盘新鲜羊膜组织,分离hAMSC,并进行传代培养。倒置相差显微镜下观察培养3 d及第3代hAMSC形态。(2)取2批次第3代hAMSC,免疫荧光染色法检测细胞波形蛋白表达,流式细胞仪检测细胞表面标志物CD90、CD73、CD105及CD45表达。(3)收集培养72 h的第3代hAMSC-CS,ELISA法检测其中胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)、血管内皮生长因子(VEGF)、EGF、bFGF的含量。(4)取包皮环切术后废弃包皮,分离人Fb,并进行传代培养。采用第3代人Fb进行以下实验。按随机数字表法(分组方法下同)将细胞分为空白对照组及10%、30%、50%、70%hAMSC-CS组,每组48孔。空白对照组用含体积分数2%FBS的DMEM/F12培养液培养,后4组分别用含相应体积分数hAMSC-CS和体积分数2%FBS的DMEM/F12培养液培养。培养12、24、48、72 h,采用细胞计数试剂盒8及酶标仪检测细胞增殖活性。选取使人Fb增殖活性最高的相应体积分数hAMSC-CS用于以下实验。(5)另取人Fb,分为空白对照组及50%hAMSC-CS组,同(4)处理,每组4孔。分别于划痕后0(即刻)、12、24、48、72 h,于倒置相差显微镜下观测细胞迁移距离。(6)另取人Fb,同(5)分组处理,每组3瓶,流式细胞仪检测细胞凋亡率。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、单因素方差分析、LSD检验、t检验。
结果(1)培养3 d,多数hAMSC形态较大,呈纺锤形多突起的Fb样或扁平多角形。第3代hAMSC呈梭形或纺锤形,波形蛋白表达呈强阳性,细胞表面标志物CD90、CD73、CD105表达阳性,CD45表达阴性。(2)hAMSC-CS中IGF-Ⅰ、VEGF、EGF、bFGF的含量分别为(11.7±1.0)、(316±68)、(6.1±0.4)、(1.49±0.05)pg/mL。(3)培养12~72 h,各hAMSC-CS组人Fb增殖活性明显高于空白对照组(P值均小于0.01),50%hAMSC-CS组人Fb增殖活性最高。(4)划痕后0 h,2组人Fb划痕宽度几乎相同。划痕后12~72 h,50%hAMSC-CS组人Fb迁移距离明显长于空白对照组(P值均小于0.01)。(5)空白对照组人Fb凋亡率为(16.2±2.4)%,明显高于50%hAMSC-CS组的(7.4±3.6)%(t=6.710,P<0.01)。
结论hAMSC-CS对人Fb的增殖和迁移具有促进作用,对人Fb的凋亡有抑制作用。
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