【摘 要】
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以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ株基因组DNA为模板扩增hsp65和esat6基因,采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得了融合基因hsp65-esat6,将hsp65-esat6连接到原核表达载体pET32a(+)上,构建重
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以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ株基因组DNA为模板扩增hsp65和esat6基因,采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得了融合基因hsp65-esat6,将hsp65-esat6连接到原核表达载体pET32a(+)上,构建重组质粒pET65-E6,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导(终浓度为1 mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析.以Ni2+亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Western-blot分析该融合蛋白的免疫活性.结果表明:Hsp65-ESAT6融合蛋白以包涵体形式表达.表达的融合蛋白裂解为两部分,即58 ku和30 ku,二者相加与预测大小88 ku相符.纯化的融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应.
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