【摘 要】
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目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)微环境中巨噬细胞极化的关键因子及其促进NSCLC进展的作用机制,寻求NSCLC治疗的潜在靶点。方法将单核细胞与A549细胞体外共培养,采用流式细胞术、酶联免疫吸附实验和实时荧光定量PCR法检测CD14+CD163+M2型巨噬细胞的比例,以及培养上清中巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的含量和M-CSF mRNA的表达水平。采用Transwell迁移实验和血管生成实
【机 构】
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450052 郑州大学第一附属医院生物细胞治疗中心,450052 郑州大学第一附属医院生物细胞治疗中心,450052 郑州大学第一附属医院肿瘤中心,450052 郑州大学第一附属医院生物细胞治疗中心
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目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)微环境中巨噬细胞极化的关键因子及其促进NSCLC进展的作用机制,寻求NSCLC治疗的潜在靶点。
方法将单核细胞与A549细胞体外共培养,采用流式细胞术、酶联免疫吸附实验和实时荧光定量PCR法检测CD14+CD163+M2型巨噬细胞的比例,以及培养上清中巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的含量和M-CSF mRNA的表达水平。采用Transwell迁移实验和血管生成实验分别检测CD14+CD163+M2型巨噬细胞对A549细胞侵袭转移和血管生成的影响。采用实时荧光定量PCR法检测NSCLC组织中M-CSF mRNA的表达,并分析其与NSCLC患者TNM分期和预后的关系。
结果单核细胞与A549细胞共培养后,CD14+CD163+M2型巨噬细胞的比例和培养上清中M-CSF的含量分别为(12.03±0.46)%和(299.80±73.76)pg/ml,均高于单独培养组的单核细胞[分别为(2.80±1.04)%和(43.07±11.22)pg/ml,均P<0.05]。人重组M-CSF能够促使单核细胞向CD14+CD163+M2型巨噬细胞极化。Transwell迁移实验的结果显示,加培养基组A549细胞和加CD14+CD163+M2型巨噬细胞培养上清组A549细胞的迁移细胞数分别为26个/视野和66个/视野,差异有统计学意义(P<0.01)。加培养基组人脐静脉内皮细胞系(HUVEC)细胞和加CD14+CD163+M2型巨噬细胞培养上清组HUVEC细胞的微血管密度分别为8个/视野和22个/视野,差异有统计学意义(P<0.01)。Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期NSCLC组织中M-CSF mRNA的表达水平分别为16.23±4.83和53.84±16.08,Ⅲ~Ⅳ期NSCLC患者组织中M-CSF mRNA的表达水平明显高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05)。M-CSF低表达组(26例)和高表达组(27例)患者的中位总生存时间分别为26.3个月和21.4个月,差异有统计学意义(P<0.01);中位无进展生存时间分别为25.3个月和16.6个月,差异亦有统计学意义(P<0.01)。
结论NSCLC通过分泌M-CSF诱导单核细胞向CD14+CD163+M2型巨噬细胞极化,被极化的M2型巨噬细胞能进一步促进NSCLC的转移和血管形成。M-CSF可能可以作为NSCLC潜在的治疗靶点。
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