慢病毒介导的CRISPR/Cas9敲除TGF-β1基因对鹿茸软骨细胞增殖的影响

来源 :东北林业大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：bluebird2000

【摘要】

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为探究TGF-β1基因在鹿茸快速生长期的作用,利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,设计并构建3条靶向梅花鹿TGF-β1基因第1外显子的gRNA寡核苷酸序列,在人胚肾细胞293T内

【作者】

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刘明晓韩香玉刘洪运陈丹阳李月胡薇

【机构】

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吉林农业大学

【出处】

：

东北林业大学学报

【发表日期】

：

2019年1期

【关键词】

：

鹿茸软骨细胞转化生长因子β1 CRISPR/Cas9 慢病毒 Antler cartilage cellsTransforming growth factor

【基金项目】

：

国家自然科学基金项目(31572372,30972083)

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为探究TGF-β1基因在鹿茸快速生长期的作用,利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,设计并构建3条靶向梅花鹿TGF-β1基因第1外显子的gRNA寡核苷酸序列,在人胚肾细胞293T内进行慢病毒包装,通过neo抗性筛选稳转细胞株。提取稳转细胞株总蛋白,经BCA法测定总蛋白质量浓度,Western Blot检测TGF-β1蛋白的相对表达水平;MTT法检测TGF-β1基因敲除对鹿茸软骨细胞体外增殖的影响。结果表明:成功构建了靶向梅花鹿TGF-β1的CRISPR/Cas9基因敲除载体pBOBI-gRN

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