【摘 要】
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目的探讨电压依赖性延迟整流钾通道(KV)、钙激活钾通道(KCa )和ATP 敏感性钾通道(KATP)对人支气管平滑肌细胞(HBSMCs)增殖与凋亡及其相关基因表达的影响.方法支气管组织取材于5例肺癌切除术患者癌旁正常的肺组织,将培养的HBSMCs 分为4组:(1)对照组(用不含药物的无血清培养基处理);(2)4-氨基吡啶(4-AP)组(含4 mmol/L的4-AP);(3)四乙铵(TEA)组(含1
【机 构】
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430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科,,,,
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目的探讨电压依赖性延迟整流钾通道(KV)、钙激活钾通道(KCa )和ATP 敏感性钾通道(KATP)对人支气管平滑肌细胞(HBSMCs)增殖与凋亡及其相关基因表达的影响.
方法支气管组织取材于5例肺癌切除术患者癌旁正常的肺组织,将培养的HBSMCs 分为4组:(1)对照组(用不含药物的无血清培养基处理);(2)4-氨基吡啶(4-AP)组(含4 mmol/L的4-AP);(3)四乙铵(TEA)组(含1 mmol/L的TEA);(4)格列本脲(Glib)组(含0.1 mmol/L的Glib).采用流式细胞术观察细胞的周期;应用荧光光度法检测细胞内钙;四甲基偶氮唑盐(MTT)微量比色分析法检测细胞的增殖;原位末端标记法( TUNEL)检测细胞的凋亡;免疫细胞化学技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡相关基因Fas和FasL的表达,以观察3种钾通道阻断剂对培养的HBSMCs增殖及凋亡的影响.
结果(1)对照组HBSMCs吸光度(A)值为0.30±0.08,4-AP组为0.67±0.14,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组PCNA的阳性率为(23±5)%,4-AP组为(89±7)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组细胞内Ca2+浓度为(98±7)nmol/L,4-AP组为(255±17)nmol/L,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组S+G2M期细胞数为(12.6±4.8)%,4-AP组为(28.8±2.4)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).而TEA组和Glib组HBSMCs的A值均为0.30±0.07, 两组PCNA的表达率分别为(21±5)%、(20±4)%, 两组细胞内Ca2+浓度分别为(97±7)nmol/L、(99±6)nmol/L及两组细胞S+G2M期细胞数分别为(12.8±4.4)%、(11.0±4.4)%,上述各指标与对照组比较差异均无统计学意义(P均> 0.05). (2) 对照组HBSMCs凋亡率及其相关基因Fas和FasL的表达分别为(4.36±0.66)%、(2.92±0.25)%、(4.0±0.6)%,4-AP组分别为(0.84±0.13)%、(0.92±0.16)%、(1.4±0.6)%,与对照组比较差异有统计学意义(P均< 0.01).TEA组及Glib组的凋亡率为(4.47±0.93)%、(4.33±0.77)%,两组Fas和FasL的表达分别为(2.87±0.23)%、(4.2±0.8)%、(2.91±0.26)%、(4.2±0.9)%,与对照组比较差异均无统计学意义(P均> 0.05).
结论抑制HBSMCs KV的活性可提高细胞内Ca2+浓度,促进细胞的增殖,抑制其凋亡;而KCa和KATP对HBSMCs的增殖及凋亡均无明显作用.
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