【摘 要】
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目的:表达和纯化咪唑啉受体抗血清选择性蛋白(imidazoline receptor antiserum-selected protein,IRAS pro-tein),制备IRAS蛋白的单克隆抗体。方法:采用基因重组技术在大肠杆
【机 构】
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军事医学科学院毒物药物研究所; 军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 军事医学科学院毒物药物研究所 北京100850; 北京100850;
【基金项目】
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国家重点研究发展规划“973”资助项目(No.2003CB515400)
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目的:表达和纯化咪唑啉受体抗血清选择性蛋白(imidazoline receptor antiserum-selected protein,IRAS pro-tein),制备IRAS蛋白的单克隆抗体。方法:采用基因重组技术在大肠杆菌表达IRAS蛋白;金属镍螯合的Ni-NTA亲和层析柱进行蛋白纯化;杂交瘤技术建立分泌IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株;以间接ELISA方法筛选分泌特异性IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞;采用蛋白免疫印迹、间接免疫荧光方法鉴定单克隆抗体的特异性。结果:成功表达并纯化了IRAS重组蛋白,纯度达到95%。共筛选出5株分泌IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水并纯化了IRAS的单克隆抗体,腹水中单克隆抗体效价分别为1∶8×106,1∶2×106和1∶5×106,属于IgG1亚型。该抗体能与原核及真核系统表达的IRAS重组蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光显示IRAS蛋白主要定位于细胞质中。结论:建立了稳定分泌IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,成功制备了特异性好的IRAS单克隆抗体,为研究IRAS的功能提供了有力的研究工具。
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