论文部分内容阅读
目的：构建实时荧光定量PCR标准品以定量检测人肝细胞生长因子mRNA的表达。方法：以Trizol裂解抽提法提取新鲜肝组织总RNA。以RT-PCR法制备HGFcDNA目的片段并进行扩增；以A-T载体克隆法将纯化的目的片段与pGEM-TEasy Vector连接成重组质粒并转化E．coli DH5α。采用碱裂解法提取重组质粒，联合用直接PCR、α互补法和氨苄青霉素筛选法、EcoR I限制性酶切和序列分析法鉴定其特异性。用聚乙二醇沉淀法纯化质粒并检测λ260nm吸光度，确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备FQ-