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以橄榄油为惟一碳源进行富集培养、以罗丹明B为指示剂的平板进行初筛，摇瓶复筛得到产脂肪酶菌株；利用滴定法、平板扩散法以及转酯反应试验，最终筛选出具有较高转酯活性脂肪酶的菌株B2。通过对B2进行形态学观察，生理生化测定以及16SrDNA特征片段比较分析，初步确定B2为克雷伯氏菌属（Klebsiella sp．）。通过特定引物PCR扩增得到B2菌株两个脂肪酶基因K1和K2。利用丙酮法和（NH）2SO4沉降法得到B2菌株体内的胞内酶，以叔丁醇为溶剂，催化棉籽油与甲醇反应，经过薄层层析和高效液相检测产物为生物柴油。