【摘 要】
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目的 了解微小RNA(miRNA)在急性肝功能衰竭小鼠模型中的表达谱及对其发病机制的调控作用.方法 将BALB/c小鼠85只分为4组,模型组40只用D-氨基半乳糖(D-GalN)联合脂多糖(LPS)腹
【机 构】
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上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科
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目的 了解微小RNA(miRNA)在急性肝功能衰竭小鼠模型中的表达谱及对其发病机制的调控作用.方法 将BALB/c小鼠85只分为4组,模型组40只用D-氨基半乳糖(D-GalN)联合脂多糖(LPS)腹腔注射建立肝功能衰竭模型,D-GalN单药组20只、LPS单药组20只和对照组5只分别予D-GalN、LPS和0.9%NaCl溶液腹腔注射.在给药后0、5和7 h观察小鼠肝脏组织学变化,0、1、3、5、7和9 h留取小鼠血清和肝脏组织标本.采用实时定量PCR方法检测小鼠血清及肝组织中炎性细胞因子(TNF-α和IL-6)表达水平;采用miRNA微阵列(microarray)检测小鼠肝脏中miRNA的表达谱,实时定量PCR验证其表达.体外LPS诱导小鼠巨噬细胞Raw264.7活化,诱导不同时间点收集细胞检测细胞miRNA的表达情况.组间均数比较用单因素方差分析,相关性分析采用Pearson和Spearman相关分析.结果 miRNA微阵列发现小鼠急性肝功能衰竭发病过程中miRNA的表达谱发生了明显变化,与对照组相比,模型组有97个miRNA表达变化显著(P＜0.01),其中21个miRNA在给药后5 h和7 h均表达上调,27个miRNA均表达下调,进一步PCR验证得到miR-146a和miR-155随给药时间延长表现为持续性上调,且miR-155表达与TNF-α和IL-6表达均具有良好的相关性.体外实验进一步发现miR-146a和miR-155在活化的巨噬细胞中表达上调.结论 在小鼠急性肝功能衰竭发病过程中,伴随着miRNA表达谱的变化,炎性反应相关miR-146a和miR-155明显上调,可能在急性肝功能衰竭的免疫发病机制中发挥重要的调控作用.
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