【摘 要】
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传统的DNA重组方法TypeII型限制酶技术受到片段纯化的限制，无法做到复杂混合体系中DNA片段的特异性连接。为解决这个问题，本研究将耐热连接酶链式反应（Thermostableligasechainr
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(编号:81170786;81372235;31571371);上海市教委项目(编号:14ZZ008)资助~~
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传统的DNA重组方法TypeII型限制酶技术受到片段纯化的限制，无法做到复杂混合体系中DNA片段的特异性连接。为解决这个问题，本研究将耐热连接酶链式反应（Thermostableligasechainreaction，TLCR）引入DNA片段的连接与捕获。该技术利用耐热型DNA连接酶的特性，在热循环反应中配合针对目的片段末端序列设计的单链寡核苷酸连接模板——Helper，实现目的片段的特异性连接和产物数量的指数性增长。两个质粒构建实验被用于验证TLCR技术的可行性和应用效果。首先利用TLCR技术从一个未经
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