【摘 要】
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目的:应用DNA介导的RNA干扰技术使核转录因子PAX5基因沉默,观察PAX5对下游基因调节以及细胞增殖和抗凋亡的影响.方法:筛选高表达PAX5的肿瘤细胞株.构建针对PAX5的siRNA表达载
【机 构】
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中国科学技术大学生命科学学院微尺度国家实验室
【基金项目】
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中国科学院知识创新工程项目;教育部高等学校博士学科点专项科研基金;国家自然科学基金
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目的:应用DNA介导的RNA干扰技术使核转录因子PAX5基因沉默,观察PAX5对下游基因调节以及细胞增殖和抗凋亡的影响.方法:筛选高表达PAX5的肿瘤细胞株.构建针对PAX5的siRNA表达载体并转染入多发性骨髓瘤细胞IM9,筛选稳转细胞系.RT-PCR分析PAX5敲低细胞中p53、XBP-1和c-Myc等重要基因表达水平的影响,同时用MTT和流式分析分别检测细胞增殖和细胞凋亡率.结果:PAX5在多发性骨髓瘤细胞株IM9中特异性表达,而KAS6和前列腺癌细胞DU145和PC3中没有表达.利用RNA干扰技术敲低IM9细胞中PAX5,不仅可使p53、XBP-1的表达增加,同时观察到c-Myc的表达下降.MTT实验证实PAX5基因沉默的IM9细胞增殖速率明显低于对照组细胞,同时对5-FU的药物敏感性增加.结论:PAX5在多发性骨髓瘤细胞株IM9中特异性的表达,并可促进肿瘤的生长和抗药性.本研究中进一步发现,PAX5除可调节p53和XBP-1基因的表达,c-Myc的表达也随PAX5敲低而下降,提示PAX5有可能直接参与c-Myc的转录调节并在肿瘤发生中起到作用.
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