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目的构建乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白突变体基因的真核表达载体,转染HepG2细胞,观察其表达及干扰HBV颗粒包装的显性负调节作用.方法采用PCR从质粒pHBVadr1-A1中扩增HBV C 基因和S基因,分别克隆到pGEM-T载体上,构建成pGEM-T-C和pGEM-T-S.进而构建成pGEM-T-CS载体,用HindⅢ切出克隆基因片段与pcDNA3.1+连接,经PCR鉴定后构建成真核表达载体pcDNA3.1+-CS.DNA测序显示基因融合正确.表达载体转染HepG2细胞,经G418筛选得到高拷贝转化子,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测重组蛋白体外表达.用HBV阳性血清感染HepG2细胞,72 h后抽提细胞内HBV DNA,斑点杂交法分析各组DNA.结果核心蛋白突变体在HepG2细胞内得到表达,且表达了该重组蛋白的HepG2细胞内HBV DNA量不同程度地低于对照组.表明重组蛋白具有抗HBV包装的DN突变体作用.结论 HBV核心蛋白与表面蛋白融合基因的真核表达载体pcDNA3.1+-CS能够体外表达出核心蛋白突变体,该突变体具有干扰HBV颗粒包装的显性负调节作用.