观察促分化成熟脂肪细胞对肝细胞脂肪变及水通道蛋白9（AQP9）表达的影响，并探讨其可能的作用机制。
方法培养人前体脂肪细胞并促分化至完全成熟，将HepG2细胞分别与未促分化脂肪细胞及促分化成熟脂肪细胞共培养48 h，分别标记为对照组及实验组。对共培养的HepG2细胞进行油红O染色及细胞内甘油三酯含量检测，同时检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）-丝苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路变化及AQP9 mRNA和蛋白水平变化情况。实验组在共培养的同时加入100 ng/ml PI3K-Akt通路激动剂重组人胰岛素样生长因子-1（IGF-1），标记为实验组+ IGF-1组，蛋白质印迹法（WB）验证PI3K-Akt通路的激活，同时RT-qPCR和WB检测AQP9的表达变化。通过重组慢病毒转染技术将HepG2细胞进行重组慢病毒LV-AQP9或空载体LV-PWPI转染，分别标记为HepG2-AQP9组和HepG2-PWPI组，激光共聚焦检测转染效率，RT-qPCR和WB检测病毒转染后AQP9表达水平的变化，随后将稳定过表达的HepG2-AQP9细胞和空载HepG2-PWPI细胞分别与促分化成熟脂肪细胞共培养48 h，分别标记为HepG2-AQP9共培养组和HepG2-PWPI共培养组，再进行油红O染色及细胞内甘油三酯含量的检测。最后，向HepG2-AQP9共培养组中加入IGF-1，记为HepG2-AQP9共培养+ IGF-1组，进行油红O染色及细胞内甘油三酯含量的检测，同时验证PI3K-Akt信号通路激活及AQP9 mRNA和蛋白水平变化。两独立样本间的比较用t检验。
结果与对照组相比，实验组中胞内脂滴明显增多，且胞内甘油三酯含量(0.052±0.005)显著高于对照组（0.033±0.003）（t = 5.225，P = 0.006），提示脂肪细胞共培养能够诱导HepG2细胞发生脂肪变性。RT-qPCR和WB结果分别提示实验组中AQP9 mRNA（3.615±0.330）和蛋白（0.072±0.005）的表达水平均显著高于对照组（t值分别为13.708、11.225，P值分别为0.005、< 0.001），而WB结果显示实验组中磷酸化Akt（p-Akt）蛋白的表达水平（0.116±0.003）明显低于对照组（0.202±0.003）（t = 27.136，P < 0.001），总Akt蛋白变化不明显，p-Akt/总Akt（0.182±0.017）较对照组（0.327±0.019）显著降低（t = 2.431，P = 0.001），提示脂肪细胞共培养能够抑制HepG2细胞PI3K-Akt信号通路并上调AQP9的表达水平。WB结果提示实验组+ IGF 1组中p-Akt蛋白的表达水平（0.194±0.021）明显高于实验组（0.132±0.003）（t = 5.082，P = 0.007），总Akt蛋白变化不明显，p-Akt/总Akt（0.281±0.009）较实验组（0.184±0.132）显著升高（t = 10.311，P < 0.001），同时，RT-qPCR和WB结果提示实验组+ IGF-1组中AQP9 mRNA（0.327±0.347）和蛋白（0.042±0.004）的表达水平均显著低于实验组（t值分别为33.573、5.598，P值分别为< 0.001、0.005），提示脂肪细胞共培养可能通过PI3K-Akt通路调节AQP9的表达水平。激光共聚焦结果显示转染率>90%，RTqPCR和WB结果均提示HepG2-AQP9组中AQP9的mRNA（84.526±0.325）和蛋白（0.373±0.221）表达显著高于HepG2-PWPI组（t值分别为14.953、28.931，P值分别为0.002、< 0.001)，提示稳定过表达AQP9细胞株的成功构建。与HepG2-PWPI共培养组、HepG2-AQP9共培养+ GF-1组相比，HepG2-AQP9共培养组中胞内脂滴明显增多，且胞内甘油三酯含量显著升高（t值分别为5.478、5.369，P值均为0.005），提示AQP9表达增高可以促进脂肪细胞共培养的HepG2发生脂肪变性。WB结果提示与HepG2-AQP9共培养组对比，HepG2-AQP9共培养+ IGF-1组中p-Akt蛋白的表达水平（0.168±0.006）及p-Akt/总Akt（0.265±0.009）均明显升高（t值分别为16.311、8.769，P值均< 0.001），而AQP9 mRNA（0.327±0.034）和蛋白（0.375±0.025）的表达水平显著下调（t值分别为33.573、9.146，P值分别为< 0.001、0.001）。
结论脂肪细胞共培养可诱导HepG2细胞发生脂肪变性，并可能通过抑制PI3K-Akt信号通路上调AQP9的表达参与HepG2细胞的脂肪变性。