【摘 要】
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【目的】抗菌肽作为一种潜在的抗生素替代品,开发潜力巨大。本文针对一株分离自甘肃河西盐碱土壤的具有产抗菌肽潜质的枯草芽孢杆菌B3菌株(Bacillus subtilis B3,B.subtilis
【机 构】
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甘肃农业大学食品科学与工程学院,甘肃省生物抗菌肽工程技术研究中心
【基金项目】
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甘肃省科技重大专项(2016GS09742)
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【目的】抗菌肽作为一种潜在的抗生素替代品,开发潜力巨大。本文针对一株分离自甘肃河西盐碱土壤的具有产抗菌肽潜质的枯草芽孢杆菌B3菌株(Bacillus subtilis B3,B.subtilis B3),拟构建一种有效的抗菌肽分离纯化方法,旨在为获得该抗菌肽纯品及其结构信息,并为抗菌肽制备及其制品检测提供方法参考。【方法】采用由阳离子交换层析、疏水层析和尺寸排阻层析单元组成的串联柱层析系统对B3菌株液态发酵产物进行初步分离,对不同时段的收集液做抑菌实验,比较评价分步层析效果;再通过反相HPLC进一步分离纯化后用质谱分析检测,以获得具有抑菌活性多肽的分子质量及结构信息。【结果】经串联层析法分离的具有抑菌活物质是一种小分子富脯氨酸抗菌肽,其氨基酸序列Pro-Tyr-Ile-Pro-Gln-Pro-Arg-Pro-Pro-His-Pro-Arg-Leu,其分子质量为:1567.86D,等电点为:10.84。经NCBI数据库比对,发现其为一种未报道的多肽。经抑菌活性检测表明,该抗菌肽对大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)和沙门氏杆菌(Salmonella enterica subsp.Enterica,S.enterica subsp.Enterica)均有抑菌作用,其最小抑菌质量浓度均为0.020312μg/mL。同时,该抗菌肽表现出较强的耐热性、耐酸碱性和光照稳定性。【结论】从枯草芽孢杆菌B3菌株(B.subtilis B3)发酵液中分离纯化出了一种对供试靶标菌具有抑菌活性的新抗菌肽。
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