论文部分内容阅读
目的 :采用体外共培养技术模拟乳腺脂肪微环境,研究人骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移的影响,并初步探讨其可能的机制。方法 :将重组腺病毒Ad-BMP9(以Ad-GFP作为对照)导入MDA-MB-231细胞中,构建MDA-MB-231/Ad-BMP9重组细胞,再与前体脂肪细胞3T3-L1在Transwell共培养体系中间接共培养3 d。荧光显微镜下观察共培养体系中重组腺病毒Ad-BMP9在MDA-MB-231细胞中的感染效率,并通过RT-PCR和蛋白质印迹法验证BMP9在共培养体系的MDA-MB-231细胞中成功过表达。然后,分别采用MTT法、FCM法、划痕愈合实验和Transwell迁移实验检测MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的变化;蛋白质印迹法检测共培养的2种细胞中增殖和转移相关因子瘦素(leptin)的表达水平变化;细胞免疫荧光法和蛋白质印迹法分别检测MDA-MB-231细胞中leptin受体OB-R及leptin信号通路关键分子的表达水平变化。结果 :荧光显微镜下观察到重组腺病毒Ad-BMP9在共培养体系的MDA-MB-231细胞中感染效率为70%左右,且BMP9在共培养体系的MDA-MB-231细胞中成功过表达(P<0.05)。在模拟乳腺脂肪微环境的共培养体系中过表达BMP9后,乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移受到明显抑制(P<0.05),并且细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.001)。过表达BMP9后,前体脂肪细胞3T3-L1中leptin表达显著下调(P<0.05),而MDA-MB-231细胞中磷酸化的STAT3(phosphorylated STAT3,p-STAT3)和磷酸化的ERK1/2(phosphorylated ERK1/2,p-ERK1/2)水平均明显下调(均P<0.05)。结论 :模拟乳腺脂肪微环境的共培养体系中,BMP9过表达可以调节乳腺癌细胞与前体脂肪细胞的相互作用,抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移,且该抑制作用可能与leptin经典信号通路有关。