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目的：制备G418抗性的小鼠胚胎干细胞滋养层。方法：利用一个neo基因成功整合到基因组的小鼠品系Smad3ex8+/-，从其妊娠14 d的雌鼠中获取胚胎，先制备小鼠胚胎成纤维细胞，PCR鉴定基因型后，挑选一株neo基因杂合型的小鼠胚胎成纤维细胞，用丝裂霉素C处理即获得G418抗性的小鼠胚胎干细胞滋养层。结果：利用此方法制备的滋养层能有效地支持小鼠胚胎干细胞的生长，在含G418的筛选培养基中能存活1～2周。