【摘 要】
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为建立适于SDS-PAGE分析的蚜虫蛋白质样品制备平台,以便为蚜虫蛋白质的双向电泳分析奠定基础,本研究比较了TCA/丙酮沉淀、PEG提取、饱和酚抽提和直接裂解4种蛋白质提取方法。
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(2008AA10Z224);吉林省科技厅基础研究项目(20060545)
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为建立适于SDS-PAGE分析的蚜虫蛋白质样品制备平台,以便为蚜虫蛋白质的双向电泳分析奠定基础,本研究比较了TCA/丙酮沉淀、PEG提取、饱和酚抽提和直接裂解4种蛋白质提取方法。结果表明:不同样品制备方法的蛋白提取率有显著的差异,其中直接裂解法的提取率最高,为17.43mg/g;其次是饱和酚抽提法,提取率为12.30mg/g;而PEG制备法提取率最低,只有7.96mg/g。利用SDS-PAGE电泳对不同的蛋白质样品进行了分析,发现在凝胶图谱上显现的条带也有明显的差异,其中饱和酚抽提法显现的条带数最多,为36条,且从14.4kDa～116.0kDa范围有广泛分布,条带清晰;PEG提取法条带数为30条,一些蛋白条带丢失或不明显;TCA/丙酮沉淀法的蛋白条带集中分布在25.0kDa～67.0kDa区域;直接裂解法条带数仅为24条,且小分子量的条带可辩率很低。通过以上结果可以得出,饱和酚抽提法最适用于蚜虫全蛋白样品的制备。
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