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通过原核表达技术获取肺炎链球菌(ATCC49619)自溶素LytA重组蛋白(rLytA),以此为抗原检测其抗体在健康人及社区获得性肺炎(CAP)患者外周血中的水平,为CAP的血清学诊断奠定基础。
方法根据Genbank中公布的肺炎链球菌M66菌株LytA基因序列设计合成特异性引物。以ATCC49619株基因组DNA为模板,采用原核表达技术获取相对分子质量为56 000的重组蛋白rLytA。以rLytA为抗原,建立ELISA反应模式,测定健康人及CAP患者相应IgM抗体,并与痰培养结果比较。应用χ2检验评价结果差异。
结果通过原核表达技术成功获得肺炎链球菌重组蛋白rLytA。以此为抗原,测得CAP患者血清中IgM类抗LytA的抗体滴度高于健康对照组,差异有统计学意义(P=0.000),诊断的敏感度、特异度分别为27.8%和100.0%,痰培养的敏感度和特异度分别为19.4%和72.2%。血清学诊断的敏感度与痰培养相比差异无统计学意义(χ2=0.693,P=0.405),但特异度显著高于常规痰培养结果(χ2=14.316,P=0.000)。阳性预测值为100%,IgM类抗LytA抗体的阳性结果对肺炎链球菌的感染具有确诊价值。
结论以重组蛋白LytA为抗原建立ELISA反应模式,检测IgM类LytA抗体,可能为链球菌感染性肺炎提供一条早期快速、客观诊断的途径。(中华检验医学杂志,2017, 40:212-215)