【摘 要】
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目的:探讨miR-335基因启动子区异常甲基化状态对胃癌细胞系中miR-335表达水平的影响,以及miR-335基因启动子区甲基化状态对胃癌细胞侵袭,迁移,以及增殖能力的影响.方法:1株永
【机 构】
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中国医科大学附属第四医院第二普通外科,辽宁沈阳,110032;中国医科大学塔城医院普通外科,新疆塔城,834700;
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目的:探讨miR-335基因启动子区异常甲基化状态对胃癌细胞系中miR-335表达水平的影响,以及miR-335基因启动子区甲基化状态对胃癌细胞侵袭,迁移,以及增殖能力的影响.方法:1株永生化胃黏膜上皮细胞系(GES-1)和4株胃癌细胞系(SGC-7901,MKN-45,BGC-823和AGS).实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃癌细胞株miR-335及CRKL的表达水平.甲基化特异性PCR(MSP)方法检测胃癌细胞株miR-335的基因启动子区甲基化状态.应用MTT方法检测恢复miR-335表达对胃癌细胞增殖能力的影响,Transwell侵袭迁移实验及划痕愈合实验分析恢复miR-335表达对胃癌细胞系侵袭及迁移能力的影响.结果:MSP实验结果表明,MKN-45、SGC-7901和BGC-823细胞系均存在基因启动子区异常的高甲基化状态,AGS细胞系基因启动子区亦呈部分高甲基化状态.去甲基药物5-aza-2-deoxycytidine处理后胃癌细胞miR-335的表达水平可升高2～3倍.Transwell侵袭迁移实验及划痕愈合实验表明miR-335表达水平恢复后SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力明显降低.MTT实验结果表明5-aza-2-deoxycytidine处理后的SGC-7901细胞系与对照组相比,增殖能力显著降低.结论:miR-335启动子区的异常高甲基化状态抑制了miR-335在胃癌细胞系中的表达,恢复miR-335的表达水平可以抑制胃癌细胞的增殖,迁移和侵袭能力.miR-335为胃癌的肿瘤抑制因子.
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