腺相关病毒9衣壳可变区蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

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目的 原核表达、纯化腺相关病毒9(adeno-associated virus 9,AAV9)衣壳可变区蛋白,并制备针对AAV9衣壳可变区的兔多克隆抗体。方法 设计并合成编码AAV9衣壳蛋白可变区的DNA序列,插入原核表达载体pET-30a获得质粒pET-30a-AAV-VR,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达多价抗原肽,在变性条件下经Ni-NTA树脂纯化,透析复性后将AAV9可变区蛋白免疫雄性日本大耳白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA法检测抗体效价,Western blot及细胞免疫荧光法检测抗体的特异性。结果 表达AAV9衣壳可变区蛋白的重组原核表达质粒pET-30a-AAV-VR经XhoⅠ和BglⅡ双酶切鉴定构建正确。表达的蛋白相对分子质量约为20 000,纯化后可被His标签抗体识别。制备的兔多克隆抗体效价为1∶10 240 000,能特异性识别AAV9衣壳蛋白。结论 成功表达了AAV9衣壳可变区蛋白,并制备了高效价的兔多克隆抗体,为后续AAV载体开发以及AAV生物学功能研究奠定了基础。
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