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摘 要：研究了聚维酮碘、硫酸铜、高效氯氰菊酯三种药物在一定条件下对漠斑牙鲆幼鱼（70日龄）的毒性效应。结果表明：聚维酮碘的安全浓度为4.062 g/mL；24 h半致死浓度为55.296 mg/L，48 h半致死浓度为34560 mg/L。硫酸铜的安全浓度为0.667 mg/L，24 h半致死浓度为2.812 mg/L，48 h半致死浓度为2.600 mg/L。高效氯氰菊酯的安全浓度为0.079 μg/L，24 h半致死浓度为7.112 μg/L，48 h半致死浓度为2.371 μg/L。
关键词：漠斑牙鲆； 聚维酮碘；硫酸铜；高效氯氰菊酯；毒性
中图分类号：S917
文献标识码：A
漠斑牙鲆（ParalichthysLethostigma） 属硬骨鱼纲、鲽形目、鲽亚目、牙鲆亚科、牙鲆属，又称“美国漠斑牙鲆”、“大花鲆”，为暖温性、广盐性种[1]，适温范围 3～34 ℃，适盐范围0～40‰[2]，原产于美国沿海，具有生长快、抗逆性强等优良的养殖性能[3]。
漠斑牙鲆自1999年引入福建省，现已成为我国海水鱼工厂化养殖的主要品种之一[4]，但在常规养殖过程中常出现腹胀病、出血病、缺鳃病等疾病[5]，淡化养殖中出现腹水病、烂鳍病、鳃霉病、脂肪肝病等[6]，造成惨重损失。这些细菌、真菌、寄生虫等疾病主要是由于管理不善，养殖密度高，水质恶化等因素导致，生产上常用的防治方法是用药物对鱼体进行浸泡或全池泼洒[7]，而药物对牙鲆一般具有显著毒性，因此，必须在药浴过程中严格控制药物的使用浓度和时间，一般幼鱼对有毒物质的敏感性高于成鱼[8]。为增加幼鱼期药浴的安全性，本试验应用聚维酮碘、硫酸铜、高效氯氰菊酯三种药物对牙鲆幼鱼[9]开展急性毒性试验，研究其对聚维酮碘、硫酸铜、高效氯氰菊酯药物的敏感性，进而为患病牙鲆药浴治疗提供数据参考。
1 材料与方法
1.1 材料
本试验于2014年5月-6月在天津海生水产养殖有限公司在育苗一车间进行。
1.1.1 鱼的来源和暂养 试验所用漠斑牙鲆幼鱼选体长40～50 mm，体质健壮、活力强、无外伤的正常鱼苗作试验用鱼，在水温为（18±1） ℃，盐度为22.34‰，24 h连续充气，pH为7.6的条件下暂养3 d，饵料是新鲜的卤虫，为防止饲料的影响 ，实验期间不喂食。
1.1.2 试验药品 试验药品共有3种，聚维酮碘，硫酸铜（AR）[10-11]、高效氯氰菊酯均为市售，其成分、含量及其来源如表1。
1.1.3 试验仪器 试验所用的物品主要有：充气泵（若干）、塑料盆、温度计、比重计、电子天平、格尺、烧杯、玻璃棒、网袋（200目、150目）、显微镜、自然海水、淡水、pH试纸试剂、标签、手表、量筒（250 mL、100 mL）、胶头滴管等。
1.1.4 试验用水 试验所用的海水为自然海水。其中自然海水盐度34‰左右，自然海水经沙滤后在进水管口用200目网袋过滤，进入池中的海水用0.8 mg/L的菌毒净曝气10 min静置24 h后使用。
1.2 试验方法
急性毒性试验按常规毒性试验方法[12-13]进行。根据预试验结果确定正式试验浓度范围，在此范围内按等比浓度梯度设定6个及1个对照组（CK）。每个浓度组均设2个平行，每个容器中放置10尾试验用鱼。
试验开始后，48 h内连续观察，并于24 h、48 h和96 h记录实验鱼的死亡和存活数，以及中毒症状和死亡症状。每天更换试验溶液，及时清理死鱼（以丧失游动能力、针刺无反应的作为死亡标准）。
试验容器为塑料盆，内盛5 L自然海水，水深30 cm。试验药液配制成母液后，按比例稀释成所需浓度，试验溶液现配现用。
1.3 数据处理
采用直线内插法[14]以浓度的常用对数为横坐标，死亡率为纵坐标，作出死亡率与实验药品质量浓度对数的平面坐标图，并在图上求出24、48、96 h的半致死浓度（LC50），安全浓度按下式计算：SC=48 h LC50×0.3/（24 h LC50/48 h LC50）2。
2 试验结果
2.1 聚维酮碘对漠斑牙鲆幼鱼毒性试验的结果
由图1和表3可见，聚维酮碘的安全浓度为4.062 mg/L，24 h的半致死浓度为55.296 mg/L，48 h的半致死浓度为：34.560 mg/L。对照组的正常试验鱼在整个实验过程中都静伏于底层或缓慢游动，无任何异常现象。当聚维酮碘的质量浓度为141.558 mg/L时，将漠斑牙鲆幼鱼放入药液中应激反应强烈，四处游动，2 min后可见体形弯曲，呼吸急促，呈现明显的中毒症状，5 min后伏底不动，呼吸频率加快，10 min后减慢，15 min后鳃盖张开呼吸停止，心脏停止跳动，死亡率达100%。浓度为 34.560 mg/L时，1 h后四处游动，体形有些弯曲，有明显的中毒症状，20 h后开始死亡，24 h死亡率为30%，48 h为50%。当质量浓度为 21.60 mg/L时，4 h后开始四处游动，然后恢复安静状态，96 h后的死亡率为30 %。
2.2 硫酸铜对漠斑牙鲆幼鱼毒性试验的结果
由图2和表3所示，硫酸铜的安全浓度为0667 mg/L。对照组的正常试验鱼在整个实验过程中同样都静伏于底层或缓慢游动，无任何异常现象。当硫酸铜的质量浓度为4.506 mg/L时，30 min后牙鲆急剧狂游、撞壁，1 h后表现出明显的中毒症状，身体强烈抽搐、扭曲变形，4 h后开始死亡，24 h死亡率达100%；质量浓度为2404 mg/L时，1 h后急剧狂游，11 h后有明显的中毒症状，22 h后开始死亡，24 h死亡率为20%，48 h为30%；当质量浓度为1.756 mg/L时，6 h后也出现狂游、击壁，然后变得安静，96 h死亡率为20%。漠斑牙鲆幼鱼死后身体扭曲变形。 2.3 高效氯氰菊酯对漠斑牙鲆幼鱼毒性试验的结果
由图3和表3所示，高效氯氰菊酯的安全浓度为0.079 μg/L，24 h的半致死浓度为7.112 μg/L，48 h半致死浓度为2.371 μg/L。对照组的正常试验鱼在整个实验过程中依然是静伏于底层或缓慢游动，无任何异常现象。当其浓度为 9351 μg·L-1时，7 min幼鱼出现上浮现象，20 min幼鱼出现明显中毒症状（抽搐，撞壁现象，游动减慢，运动失去平衡），1.5 h出现死亡现象；当浓度为5400 μg·L-1时，30 min出现抽搐，撞壁现象，游动减慢，3 h出现死亡。
3 讨论
3.1 漠斑牙鲆幼鱼对聚维酮碘、硫酸铜和高效氯氰菊酯的敏感程度
根据现行农药对鱼类毒性的分级标准（剧毒，LC50≤0.1 mg/L；高毒，0.1 mg/L10.0 mg/L）[15]
依据国家环保局1986 年制订的 《生物技术监测规范（水环境部分）》中将化学物质对鱼类的毒性分为 5 级：LC50<1 mg/L 为剧毒；LC50在1～100 mg/L 为高毒；LC50在100～1 000 mg/L 为中等毒性；LC50在 1 000～10 000 mg/L 为低毒；LC50>10 000 mg/L 为微毒或无毒[16-17]据此本试验得出的结论为：高效氯氰菊酯>硫酸铜>聚维酮碘。
3.2 聚维酮碘对漠斑牙鲆幼鱼毒性影响
聚维酮碘又名聚乙烯吡咯烷酮碘、碘络酮，它为广谱消毒剂，对大部分细菌、真菌和病毒等均有不同程度的杀灭作用，而且可以调节生长与代谢等作用。它主要用于鱼卵、水生动物的体表消毒；同时对病毒也有不同程度的杀灭作用。据报道聚维酮碘对海湾扇贝的SC为4.48 mg/L[18]，对皱纹盘鲍的稚鲍[19]SC为0.136 mg/L，由于试验条件所限本试验测得聚维酮碘的SC为4.062 mg/L。据悉当聚维酮碘的浓度达到一定量时，它的杀菌效果与其所释放出的有效碘浓度呈正相关，一般在较低浓度下，偏酸性环境下，稳定性好，有效碘浓度要高；温度升高时杀菌力亦增强，在水体中有机物会抑制碘的作用；但在较高浓度下聚维酮碘可使鱼体弯曲、四处狂游、呼吸急促，直至鳃盖张开死亡，因此在实际使用时应注意使用对象、有机物的含量及环境条件。
3.3 硫酸铜对漠斑牙鲆幼鱼毒性影响
硫酸铜俗称蓝矾 胆矾或石矾 是一种重金属盐类，常温下为深蓝色的三斜系结晶体或蓝色透明结晶性颗粒或结晶性粉末，对病原体有较强的抑制和杀伤作用，同时对藻类也有很强的杀灭作用[19]，而本试验则使用的是蓝色透明结晶性颗粒。硫酸铜在养殖中，常用于一些寄生虫引起的疾病，特别对原虫动物如小瓜虫，刺激隐核虫等有很强的杀伤力。其主要作用机理是铜离子与病原体体内的蛋白质结合生成蛋白盐，使蛋白质变性、沉淀，使酶失去活性，从而杀死病原体。因此，在防治寄生虫引起的疾病时，能获得较好的效果[20]。漠斑牙鲆幼鱼对硫酸铜的耐受性在三种药物中不是最敏感的，其24 h的LC50为2.912 mg/L，SC为0.667 mg/L，刚刚符合硫酸铜的常用浓度0.500～0.700 mg/L，因此使用时一定要谨慎，同时因为硫酸铜的安全浓度范围较小，据报道一般情况 ，浓度应控制在0 .7 mg/L，若浓度低于0.5 mg/L，杀虫效果较差 浓度高于1 mg/L，鱼就有中毒死亡的危险[21]。因此硫酸铜的施用应根据水质情况，增减药量（水中溶解有机物特别是蛋白质及多羟基化合物能与硫酸铜形成复合物，降低硫酸铜的药性，因此若水质较肥，水温较低时，可适当加大药量，反之，减少药量）。
3.4 高效氯氰菊酯对漠斑牙鲆幼鱼毒性影响
高效氯氰菊酯是一种微乳液形式[22]的白色药液，可在表面活性的作用下增强其稳定性。对昆虫有很高的胃毒和触杀作用，具有杀卵活性，杀虫谱广，对棉花、蔬菜、果树等农林害虫以及蚊蝇、蟑螂、跳蚤、臭虫和蚂蚁等卫生害虫有极高的杀灭效果。本试验中当高效氯氰菊酯[23]达到一定浓度后，漠斑牙鲆幼鱼则出现抽搐、运动失调、麻醉等症状，最后死亡。原因如谢文平研究所报道[24]高效氯氰菊酯通过鳃的吸附进入鱼体内后，增加神经系统对其敏感性，同时对离子转运、渗透压平衡、能量代谢、呼吸等造成严重的影响，所以高效氯氰菊酯应在水产上特别注意。
参考文献：
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Abstract：the author research the Acute toxicity tests of PVP-I，cupric sulfate and cypermethrin on the ParalichthysLethostigma juveniles（70 d） In this study.The results showed that the safe concentration of the PVP-I to ParalichthysLethostigma juveniles was 4.062 mg/L，the semi-lethal concentrations of 24 h was 55.296 mg/L and 34.560 mg/L was the semi-lethal concentrations of 48 h.The safe concentration，of cupric sulfate was 0.667 mg/L.the semi-lethal concentrations of 24 h was 2812 mg/L and 2.600 mg/L was the semi-lethal concentrations of 48 h.The safe concentration of effective cypermethrin was 0.079 mg/L. Semi-lethal concentrations of 24 h was 7.112 μg/L and 2371 μg/L was its semi-lethal concentrations of 48 h.
Key words：ParlichthysLethostigma； PVP-I； cupric sulfate； effective cypermethrin； acute toxic
（收稿日期：2015-03-10）
关键词：漠斑牙鲆； 聚维酮碘；硫酸铜；高效氯氰菊酯；毒性
中图分类号：S917
文献标识码：A
漠斑牙鲆（ParalichthysLethostigma） 属硬骨鱼纲、鲽形目、鲽亚目、牙鲆亚科、牙鲆属，又称“美国漠斑牙鲆”、“大花鲆”，为暖温性、广盐性种[1]，适温范围 3～34 ℃，适盐范围0～40‰[2]，原产于美国沿海，具有生长快、抗逆性强等优良的养殖性能[3]。
漠斑牙鲆自1999年引入福建省，现已成为我国海水鱼工厂化养殖的主要品种之一[4]，但在常规养殖过程中常出现腹胀病、出血病、缺鳃病等疾病[5]，淡化养殖中出现腹水病、烂鳍病、鳃霉病、脂肪肝病等[6]，造成惨重损失。这些细菌、真菌、寄生虫等疾病主要是由于管理不善，养殖密度高，水质恶化等因素导致，生产上常用的防治方法是用药物对鱼体进行浸泡或全池泼洒[7]，而药物对牙鲆一般具有显著毒性，因此，必须在药浴过程中严格控制药物的使用浓度和时间，一般幼鱼对有毒物质的敏感性高于成鱼[8]。为增加幼鱼期药浴的安全性，本试验应用聚维酮碘、硫酸铜、高效氯氰菊酯三种药物对牙鲆幼鱼[9]开展急性毒性试验，研究其对聚维酮碘、硫酸铜、高效氯氰菊酯药物的敏感性，进而为患病牙鲆药浴治疗提供数据参考。
1 材料与方法
1.1 材料
本试验于2014年5月-6月在天津海生水产养殖有限公司在育苗一车间进行。
1.1.1 鱼的来源和暂养 试验所用漠斑牙鲆幼鱼选体长40～50 mm，体质健壮、活力强、无外伤的正常鱼苗作试验用鱼，在水温为（18±1） ℃，盐度为22.34‰，24 h连续充气，pH为7.6的条件下暂养3 d，饵料是新鲜的卤虫，为防止饲料的影响 ，实验期间不喂食。
1.1.2 试验药品 试验药品共有3种，聚维酮碘，硫酸铜（AR）[10-11]、高效氯氰菊酯均为市售，其成分、含量及其来源如表1。
1.1.3 试验仪器 试验所用的物品主要有：充气泵（若干）、塑料盆、温度计、比重计、电子天平、格尺、烧杯、玻璃棒、网袋（200目、150目）、显微镜、自然海水、淡水、pH试纸试剂、标签、手表、量筒（250 mL、100 mL）、胶头滴管等。
1.1.4 试验用水 试验所用的海水为自然海水。其中自然海水盐度34‰左右，自然海水经沙滤后在进水管口用200目网袋过滤，进入池中的海水用0.8 mg/L的菌毒净曝气10 min静置24 h后使用。
1.2 试验方法
急性毒性试验按常规毒性试验方法[12-13]进行。根据预试验结果确定正式试验浓度范围，在此范围内按等比浓度梯度设定6个及1个对照组（CK）。每个浓度组均设2个平行，每个容器中放置10尾试验用鱼。
试验开始后，48 h内连续观察，并于24 h、48 h和96 h记录实验鱼的死亡和存活数，以及中毒症状和死亡症状。每天更换试验溶液，及时清理死鱼（以丧失游动能力、针刺无反应的作为死亡标准）。
试验容器为塑料盆，内盛5 L自然海水，水深30 cm。试验药液配制成母液后，按比例稀释成所需浓度，试验溶液现配现用。
1.3 数据处理
采用直线内插法[14]以浓度的常用对数为横坐标，死亡率为纵坐标，作出死亡率与实验药品质量浓度对数的平面坐标图，并在图上求出24、48、96 h的半致死浓度（LC50），安全浓度按下式计算：SC=48 h LC50×0.3/（24 h LC50/48 h LC50）2。
2 试验结果
2.1 聚维酮碘对漠斑牙鲆幼鱼毒性试验的结果
由图1和表3可见，聚维酮碘的安全浓度为4.062 mg/L，24 h的半致死浓度为55.296 mg/L，48 h的半致死浓度为：34.560 mg/L。对照组的正常试验鱼在整个实验过程中都静伏于底层或缓慢游动，无任何异常现象。当聚维酮碘的质量浓度为141.558 mg/L时，将漠斑牙鲆幼鱼放入药液中应激反应强烈，四处游动，2 min后可见体形弯曲，呼吸急促，呈现明显的中毒症状，5 min后伏底不动，呼吸频率加快，10 min后减慢，15 min后鳃盖张开呼吸停止，心脏停止跳动，死亡率达100%。浓度为 34.560 mg/L时，1 h后四处游动，体形有些弯曲，有明显的中毒症状，20 h后开始死亡，24 h死亡率为30%，48 h为50%。当质量浓度为 21.60 mg/L时，4 h后开始四处游动，然后恢复安静状态，96 h后的死亡率为30 %。
2.2 硫酸铜对漠斑牙鲆幼鱼毒性试验的结果
由图2和表3所示，硫酸铜的安全浓度为0667 mg/L。对照组的正常试验鱼在整个实验过程中同样都静伏于底层或缓慢游动，无任何异常现象。当硫酸铜的质量浓度为4.506 mg/L时，30 min后牙鲆急剧狂游、撞壁，1 h后表现出明显的中毒症状，身体强烈抽搐、扭曲变形，4 h后开始死亡，24 h死亡率达100%；质量浓度为2404 mg/L时，1 h后急剧狂游，11 h后有明显的中毒症状，22 h后开始死亡，24 h死亡率为20%，48 h为30%；当质量浓度为1.756 mg/L时，6 h后也出现狂游、击壁，然后变得安静，96 h死亡率为20%。漠斑牙鲆幼鱼死后身体扭曲变形。 2.3 高效氯氰菊酯对漠斑牙鲆幼鱼毒性试验的结果
由图3和表3所示，高效氯氰菊酯的安全浓度为0.079 μg/L，24 h的半致死浓度为7.112 μg/L，48 h半致死浓度为2.371 μg/L。对照组的正常试验鱼在整个实验过程中依然是静伏于底层或缓慢游动，无任何异常现象。当其浓度为 9351 μg·L-1时，7 min幼鱼出现上浮现象，20 min幼鱼出现明显中毒症状（抽搐，撞壁现象，游动减慢，运动失去平衡），1.5 h出现死亡现象；当浓度为5400 μg·L-1时，30 min出现抽搐，撞壁现象，游动减慢，3 h出现死亡。
3 讨论
3.1 漠斑牙鲆幼鱼对聚维酮碘、硫酸铜和高效氯氰菊酯的敏感程度
根据现行农药对鱼类毒性的分级标准（剧毒，LC50≤0.1 mg/L；高毒，0.1 mg/L
依据国家环保局1986 年制订的 《生物技术监测规范（水环境部分）》中将化学物质对鱼类的毒性分为 5 级：LC50<1 mg/L 为剧毒；LC50在1～100 mg/L 为高毒；LC50在100～1 000 mg/L 为中等毒性；LC50在 1 000～10 000 mg/L 为低毒；LC50>10 000 mg/L 为微毒或无毒[16-17]据此本试验得出的结论为：高效氯氰菊酯>硫酸铜>聚维酮碘。
3.2 聚维酮碘对漠斑牙鲆幼鱼毒性影响
聚维酮碘又名聚乙烯吡咯烷酮碘、碘络酮，它为广谱消毒剂，对大部分细菌、真菌和病毒等均有不同程度的杀灭作用，而且可以调节生长与代谢等作用。它主要用于鱼卵、水生动物的体表消毒；同时对病毒也有不同程度的杀灭作用。据报道聚维酮碘对海湾扇贝的SC为4.48 mg/L[18]，对皱纹盘鲍的稚鲍[19]SC为0.136 mg/L，由于试验条件所限本试验测得聚维酮碘的SC为4.062 mg/L。据悉当聚维酮碘的浓度达到一定量时，它的杀菌效果与其所释放出的有效碘浓度呈正相关，一般在较低浓度下，偏酸性环境下，稳定性好，有效碘浓度要高；温度升高时杀菌力亦增强，在水体中有机物会抑制碘的作用；但在较高浓度下聚维酮碘可使鱼体弯曲、四处狂游、呼吸急促，直至鳃盖张开死亡，因此在实际使用时应注意使用对象、有机物的含量及环境条件。
3.3 硫酸铜对漠斑牙鲆幼鱼毒性影响
硫酸铜俗称蓝矾 胆矾或石矾 是一种重金属盐类，常温下为深蓝色的三斜系结晶体或蓝色透明结晶性颗粒或结晶性粉末，对病原体有较强的抑制和杀伤作用，同时对藻类也有很强的杀灭作用[19]，而本试验则使用的是蓝色透明结晶性颗粒。硫酸铜在养殖中，常用于一些寄生虫引起的疾病，特别对原虫动物如小瓜虫，刺激隐核虫等有很强的杀伤力。其主要作用机理是铜离子与病原体体内的蛋白质结合生成蛋白盐，使蛋白质变性、沉淀，使酶失去活性，从而杀死病原体。因此，在防治寄生虫引起的疾病时，能获得较好的效果[20]。漠斑牙鲆幼鱼对硫酸铜的耐受性在三种药物中不是最敏感的，其24 h的LC50为2.912 mg/L，SC为0.667 mg/L，刚刚符合硫酸铜的常用浓度0.500～0.700 mg/L，因此使用时一定要谨慎，同时因为硫酸铜的安全浓度范围较小，据报道一般情况 ，浓度应控制在0 .7 mg/L，若浓度低于0.5 mg/L，杀虫效果较差 浓度高于1 mg/L，鱼就有中毒死亡的危险[21]。因此硫酸铜的施用应根据水质情况，增减药量（水中溶解有机物特别是蛋白质及多羟基化合物能与硫酸铜形成复合物，降低硫酸铜的药性，因此若水质较肥，水温较低时，可适当加大药量，反之，减少药量）。
3.4 高效氯氰菊酯对漠斑牙鲆幼鱼毒性影响
高效氯氰菊酯是一种微乳液形式[22]的白色药液，可在表面活性的作用下增强其稳定性。对昆虫有很高的胃毒和触杀作用，具有杀卵活性，杀虫谱广，对棉花、蔬菜、果树等农林害虫以及蚊蝇、蟑螂、跳蚤、臭虫和蚂蚁等卫生害虫有极高的杀灭效果。本试验中当高效氯氰菊酯[23]达到一定浓度后，漠斑牙鲆幼鱼则出现抽搐、运动失调、麻醉等症状，最后死亡。原因如谢文平研究所报道[24]高效氯氰菊酯通过鳃的吸附进入鱼体内后，增加神经系统对其敏感性，同时对离子转运、渗透压平衡、能量代谢、呼吸等造成严重的影响，所以高效氯氰菊酯应在水产上特别注意。
参考文献：
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Abstract：the author research the Acute toxicity tests of PVP-I，cupric sulfate and cypermethrin on the ParalichthysLethostigma juveniles（70 d） In this study.The results showed that the safe concentration of the PVP-I to ParalichthysLethostigma juveniles was 4.062 mg/L，the semi-lethal concentrations of 24 h was 55.296 mg/L and 34.560 mg/L was the semi-lethal concentrations of 48 h.The safe concentration，of cupric sulfate was 0.667 mg/L.the semi-lethal concentrations of 24 h was 2812 mg/L and 2.600 mg/L was the semi-lethal concentrations of 48 h.The safe concentration of effective cypermethrin was 0.079 mg/L. Semi-lethal concentrations of 24 h was 7.112 μg/L and 2371 μg/L was its semi-lethal concentrations of 48 h.
Key words：ParlichthysLethostigma； PVP-I； cupric sulfate； effective cypermethrin； acute toxic
（收稿日期：2015-03-10）