抗SSA表位特异性单链噬菌体抗体的可溶性表达及鉴定

来源 :中华内科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tianyemin
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目的 获得可溶性抗人SSA抗原表位特异性单链抗体(ScFv).方法 以赖氨酸为支架八倍体合成3条相对分子质量为60 000的SSA抗原氨基酸多肽链(MAP):MAP 482~493(P1表位)、MAP 310~323(P2表位)和MAP 230~241(P3表位).以P1~P3表位为包被抗原,富集筛选相应的噬菌体单克隆抗体(McAb);阳性克隆特异性、亲和力和序列分析鉴定;表位特异性McAb可溶性表达和鉴定.结果 5轮筛选后,获得了抗3种表位抗体的含完整插入片断的克隆株,具有较高亲和力和特异性.抗P1~P3抗体融合蛋白与相应表位反应的410 nm吸光度值分别为1.43±0.23、0.82±0.31、0.80±0.25,组间交叉反应差异有统计学意义(P值均小于0.01).其中3个克隆表位特异性McAb-ScFv克隆成功,可溶性表达并纯化.以Hep-2细胞为底物,间接免疫荧光法(ⅡF)检测显示,可溶性ScFv抗体具有在体活性.结论 筛选获得的阳性克隆成功,可溶性表达并具有较好的亲和力、特异性和在体活性,可胜任靶器官的表位表达情况的检测.
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