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摘 要：为了解贵阳市空肠弯曲菌对常用药物的敏感性情况，从规模化养殖场和大型农贸市场采集了175份猪和鸡肛门拭子，进行空肠弯曲杆菌的分离鉴定，并采用微生物药物敏感性试验执行标准（CLSI M100-S20）测定其对12种抗菌药物的耐药情况，结果表明，共分离得到29株空肠弯曲杆菌，分离率为16.57%。分离菌对12种抗菌药物的耐药率分别是多粘菌素E100%、头孢噻呋100%、磺胺异恶唑82.76%、土霉素82.76%、氟苯尼考75.86%、氨苄西林68.96%、阿莫西林68.96%、庆大霉素62.07%、恩诺沙星55.17%、氧氟沙星51.72%、大观霉素41.38%、SMZ34.48%。所有受试菌株中的89.96%具5重以上的耐药性。
关键词：空肠弯曲菌；耐药性；微量肉汤稀释法；药敏试验
中图分类号：S852.61 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.03.010
空肠弯曲杆菌是引起人肠道感染的主要代表菌之一，是一种人和家畜都可携带的病原菌，普遍存在于恒温动物中，家禽中鸡的带菌率最高，除引起肠炎腹泻外，还引起食物中毒，并伴发关节炎、肝炎、格林-巴利综合症等免疫损伤性疾病[1-3]。在兽医学上，可导致猪、牛、羊流产，不孕，腹泻以及家禽肝炎[4]。2009年6月农业部对各省、自治区、直辖市下达的动物源细菌耐药性监测计划中包含了空肠弯曲杆菌，因此，空肠弯曲杆菌及其引起的疾病越来越受到关注。本研究就贵阳市花溪区大型农贸市场及养殖场猪源、鸡源空肠弯曲杆菌对12种市售常用抗菌药物的敏感性进行了测定。
1 材料和方法
1.1 材 料
1.1.1 样品 从花溪地区规模化养殖场和大型农贸市场共采集175份肛门拭子，其中养殖场鸡源肛门拭子125份，猪源肛门拭子25份，农贸市场鸡源肛门拭子25份。
1.1.2 标准菌株 空肠弯曲杆菌标准菌株（CIC222936）购自中国工业生物菌种保藏管理中心。
1.1.3 培养基及试剂 bolton选择性增菌肉汤、布氏肉汤、MH肉汤，改良CCD琼脂，skirrow琼脂，哥伦比亚琼脂均购自上海博微生物科技有限公司；3%过氧化氢、无菌脱纤维羊血购自贵州赛兰博生物科技公司；氧化酶试纸、马尿酸钠水解试剂、吲哚乙酸纸片购自青岛海博生物技术有限公司；微需氧产气袋购自上海宝曼生物科技有限公司。
1.1.4 抗菌药物 氨苄西林（AM）、阿莫西林（A）、头孢噻呋（CEF）、庆大霉素（GM）、大观霉素（SPT）、氟苯尼考（FFC）、磺胺甲基异恶唑（SQ）、复方新诺明（SMZ）、恩诺沙星（ENR）、氧氟沙星（OFL）、多粘菌素E（PME）和土霉素（OTC）购自杭州博微生物技术有限公司。
1.2 方 法
1.2.1 菌株的分离鉴定 空肠弯曲菌的分离鉴定按GB/T 4789.9—2008的标准进行[5]。
1.2.2 药敏试验 按照《细菌耐药性检测抗感染治疗》及微生物药物敏感性试验执行标准（CLSI m100-s20）进行[6-7]。抗菌药物敏感性试验判定标准如表1所示。
2 结果与分析
2.1 空肠弯曲杆菌的检出率
150份鸡源肛门拭子样品中检出空肠弯曲菌26株，其中农贸市场17株，规模养殖场9株，检出率17.3%；25份猪源肛门拭子检出3株；检出率为12%，平均阳性率16.57%。
2.2 药敏试验结果
从表2可以看出，分离菌对12种抗菌药物的耐药率分别是多粘菌素E100%、头孢噻呋100%、磺胺异恶唑82.76%、土霉素82.76%、氟苯尼考75.86%、氨苄西林68.96%、阿莫西林68.96%、庆大霉素62.07%、恩诺沙星55.17%、氧氟沙星1.72%、大观霉素41.38%、复方新诺明34.48%。
2.3 多重耐药情况
29株空肠弯曲菌中所有菌株均出现了多重耐药性，最低的2重耐药，最高12重耐药，89.66%的菌株出现了5重以上的耐药性（表3）。
3 讨 论
本试验采用微需氧产气袋分离空肠弯曲杆菌的分离率为16.57%，高于江苏地区7.6%、河南0.6%、华东地区8.96%的分离率[9-11]，低于山东30.8%、上海43.2%、安徽45.2%、浙江30.4%等地屠宰场中猪盲肠的分出率[11]。在本研究中，鸡源样品检出率高于猪源样品，这也说明了家禽中鸡是空肠弯曲杆菌带菌率最高的动物，曾有报告鸡携带空肠弯曲杆菌最高可达100%[12]，因此，做好对鸡源空肠弯曲菌的有效监控对于防控空肠弯曲菌病的发生及其传播具有重要意义。
本试验采用微量肉汤法对所分离29株空肠弯曲菌进行12种常用抗菌药物药敏试验，结果表明，大观霉素41.38%，庆大霉素62.07%的耐药率远高于江苏地区 14.8%[8]；比Reina[13]、Bardon[14]报道的1%～9.4%有明显增高；29株空肠弯曲菌对氨苄西林68.96%耐药率高于薛峰等[10]37.96%、李彩金等[15]36%检测结果；而对复方新诺明34.48%耐药性低于侯凤琴等[16]（88.5%）、黄金林等[17]99.07%，因此，上述药物应为本地区养殖场治疗空肠弯曲菌病的优选药物。此外全部菌株都出现了多重耐药性，多数受试株出现5重以上耐药性，这提示在实际用药中避免同时交叉用药，应该科学间歇性轮换用药。
参考文献：
[1] Engberg J，Aarestrup F M，Taulor D E， et al. Quinolone and macrolidc resistance in Campylobacter jejuni and C.coli： Resistance mechanisms and trends in Human isolates [J]. Emerging Infectious Diseases， 2001，7 （1）：24-34. [2] Bereswill S， Kist M. Recent developments in Campylobacter pathogenesis [J]. Current Opinion in Infection Disease， 2003，16（5），487-491.
[3] Smith M V， Muldoon P J. Campylobacter fetus subspecies jejuni from commercially processed poultry[J]. Aplied Microbiology，1974，27（5）：995-996.
[4] Jayarao B M， Donaldson S C， Straley B A， et al. A suruey of foodborne pat hogens in bulk tank milk and raw milk and raw milk consumption among farm families in pennsy lvania[J]. Dairy Sci， 2006，89（7）：2451-2455.
[5] 中华人民共和国国家标准.食品卫生微生物检验空肠弯曲菌检验（GB/T 4789.9-2008） [S].北京：中国标准出版社，2010.
[6] CLSI.Performance standaids for antimicrobial susceptibility testing； nineteenth informational supplement.-CLSI document
M100-S 19[S].2009.
[7] 倪语星，洪秀华.细菌耐药性检测抗感染治疗[M].北京：人民军医出版社，2002：54-57.
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[9] 张秀丽，廖兴广，张丁.2005年河南省食源性致病菌和耐药性监测[J].中国卫生检验杂志，2006，16（7）：842-844.
[10] 薛峰，徐飞，陈颖，等.2006-2008年华东地区空肠弯曲菌动物源分离株分子分型研究[C]//动物检疫学分会.2010年年会论文集.乌鲁木齐：中国畜牧兽医学会，2010：112-116.
[11] 侯佩兴，侯建军，吴忠亮，等.猪空肠弯曲杆菌感染状况的地域差异性研究[J]. 上海交通大学学报，2009，27（5）：513-519.
[12] Smith M V， Muldoon P J. Campylobacter fetus subspecies jejuni（Vibrio fetus） from commercially processed poultry[J].Applied Microbiology，1974，27（5）：995-996.
[13] Reina J. Susceptibilities to 10 antimicrobial agents of 1220 Campylobacter strains isolated from 1987 to 1993 from feces of pediatric patients [J]. Antimicrob Agents Chemother， 1994， 38（12）： 2917.
[14] Bardon J. Prevalence of Campylobacter jejuni and its resistance to antibiotics in poultry in the Czech Republic[J]. Zoonoses and Public Health，2008， 56： 111-116.
[15] 李彩金，谢永强，周珍文. 2008-2011年广州地区腹泻儿童空肠弯曲菌感染情况及耐药性变迁[J]. 热带医学杂志， 2012，12（6）：730-732.
[16] 侯凤琴，沈宝铨，孙新婷. 200株弯曲菌对抗生素敏感性研究[J].中华医院感染学杂志，200，11（6）：406-408.
[17] 黄金林，许海燕，张弓，等. 江苏奶牛空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况及耐药性分析[J]. 中国人兽共患病学报， 2007， 23 （10）：1016-1020.
关键词：空肠弯曲菌；耐药性；微量肉汤稀释法；药敏试验
中图分类号：S852.61 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.03.010
空肠弯曲杆菌是引起人肠道感染的主要代表菌之一，是一种人和家畜都可携带的病原菌，普遍存在于恒温动物中，家禽中鸡的带菌率最高，除引起肠炎腹泻外，还引起食物中毒，并伴发关节炎、肝炎、格林-巴利综合症等免疫损伤性疾病[1-3]。在兽医学上，可导致猪、牛、羊流产，不孕，腹泻以及家禽肝炎[4]。2009年6月农业部对各省、自治区、直辖市下达的动物源细菌耐药性监测计划中包含了空肠弯曲杆菌，因此，空肠弯曲杆菌及其引起的疾病越来越受到关注。本研究就贵阳市花溪区大型农贸市场及养殖场猪源、鸡源空肠弯曲杆菌对12种市售常用抗菌药物的敏感性进行了测定。
1 材料和方法
1.1 材 料
1.1.1 样品 从花溪地区规模化养殖场和大型农贸市场共采集175份肛门拭子，其中养殖场鸡源肛门拭子125份，猪源肛门拭子25份，农贸市场鸡源肛门拭子25份。
1.1.2 标准菌株 空肠弯曲杆菌标准菌株（CIC222936）购自中国工业生物菌种保藏管理中心。
1.1.3 培养基及试剂 bolton选择性增菌肉汤、布氏肉汤、MH肉汤，改良CCD琼脂，skirrow琼脂，哥伦比亚琼脂均购自上海博微生物科技有限公司；3%过氧化氢、无菌脱纤维羊血购自贵州赛兰博生物科技公司；氧化酶试纸、马尿酸钠水解试剂、吲哚乙酸纸片购自青岛海博生物技术有限公司；微需氧产气袋购自上海宝曼生物科技有限公司。
1.1.4 抗菌药物 氨苄西林（AM）、阿莫西林（A）、头孢噻呋（CEF）、庆大霉素（GM）、大观霉素（SPT）、氟苯尼考（FFC）、磺胺甲基异恶唑（SQ）、复方新诺明（SMZ）、恩诺沙星（ENR）、氧氟沙星（OFL）、多粘菌素E（PME）和土霉素（OTC）购自杭州博微生物技术有限公司。
1.2 方 法
1.2.1 菌株的分离鉴定 空肠弯曲菌的分离鉴定按GB/T 4789.9—2008的标准进行[5]。
1.2.2 药敏试验 按照《细菌耐药性检测抗感染治疗》及微生物药物敏感性试验执行标准（CLSI m100-s20）进行[6-7]。抗菌药物敏感性试验判定标准如表1所示。
2 结果与分析
2.1 空肠弯曲杆菌的检出率
150份鸡源肛门拭子样品中检出空肠弯曲菌26株，其中农贸市场17株，规模养殖场9株，检出率17.3%；25份猪源肛门拭子检出3株；检出率为12%，平均阳性率16.57%。
2.2 药敏试验结果
从表2可以看出，分离菌对12种抗菌药物的耐药率分别是多粘菌素E100%、头孢噻呋100%、磺胺异恶唑82.76%、土霉素82.76%、氟苯尼考75.86%、氨苄西林68.96%、阿莫西林68.96%、庆大霉素62.07%、恩诺沙星55.17%、氧氟沙星1.72%、大观霉素41.38%、复方新诺明34.48%。
2.3 多重耐药情况
29株空肠弯曲菌中所有菌株均出现了多重耐药性，最低的2重耐药，最高12重耐药，89.66%的菌株出现了5重以上的耐药性（表3）。
3 讨 论
本试验采用微需氧产气袋分离空肠弯曲杆菌的分离率为16.57%，高于江苏地区7.6%、河南0.6%、华东地区8.96%的分离率[9-11]，低于山东30.8%、上海43.2%、安徽45.2%、浙江30.4%等地屠宰场中猪盲肠的分出率[11]。在本研究中，鸡源样品检出率高于猪源样品，这也说明了家禽中鸡是空肠弯曲杆菌带菌率最高的动物，曾有报告鸡携带空肠弯曲杆菌最高可达100%[12]，因此，做好对鸡源空肠弯曲菌的有效监控对于防控空肠弯曲菌病的发生及其传播具有重要意义。
本试验采用微量肉汤法对所分离29株空肠弯曲菌进行12种常用抗菌药物药敏试验，结果表明，大观霉素41.38%，庆大霉素62.07%的耐药率远高于江苏地区 14.8%[8]；比Reina[13]、Bardon[14]报道的1%～9.4%有明显增高；29株空肠弯曲菌对氨苄西林68.96%耐药率高于薛峰等[10]37.96%、李彩金等[15]36%检测结果；而对复方新诺明34.48%耐药性低于侯凤琴等[16]（88.5%）、黄金林等[17]99.07%，因此，上述药物应为本地区养殖场治疗空肠弯曲菌病的优选药物。此外全部菌株都出现了多重耐药性，多数受试株出现5重以上耐药性，这提示在实际用药中避免同时交叉用药，应该科学间歇性轮换用药。
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[12] Smith M V， Muldoon P J. Campylobacter fetus subspecies jejuni（Vibrio fetus） from commercially processed poultry[J].Applied Microbiology，1974，27（5）：995-996.
[13] Reina J. Susceptibilities to 10 antimicrobial agents of 1220 Campylobacter strains isolated from 1987 to 1993 from feces of pediatric patients [J]. Antimicrob Agents Chemother， 1994， 38（12）： 2917.
[14] Bardon J. Prevalence of Campylobacter jejuni and its resistance to antibiotics in poultry in the Czech Republic[J]. Zoonoses and Public Health，2008， 56： 111-116.
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[16] 侯凤琴，沈宝铨，孙新婷. 200株弯曲菌对抗生素敏感性研究[J].中华医院感染学杂志，200，11（6）：406-408.
[17] 黄金林，许海燕，张弓，等. 江苏奶牛空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况及耐药性分析[J]. 中国人兽共患病学报， 2007， 23 （10）：1016-1020.