【摘 要】
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目的 探讨脯氨酸4-羟化酶Ⅱ（P4HA2）在肝癌细胞发生发展中的作用及相关机制。方法 利用GEPIA、Human Protein Atlas数据库预测P4HA2在肝癌中的表达情况，利用K-M plotter在线数据库分析P4HA2的表达情况与肝癌预后的关系，采用qRT-PCR和Western blot检测肝癌细胞和正常肝细胞中P4HA2的表达。构建慢病毒载体，用携带P4HA2 shRNA和Con
【机 构】
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蚌埠医学院肿瘤基础研究与临床检验诊断重点实验室
【基金项目】
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安徽省教育厅自然科学研究项目（KJ2017A234）； 蚌埠医学院科技项目（2020byzd023）；
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目的 探讨脯氨酸4-羟化酶Ⅱ（P4HA2）在肝癌细胞发生发展中的作用及相关机制。方法 利用GEPIA、Human Protein Atlas数据库预测P4HA2在肝癌中的表达情况，利用K-M plotter在线数据库分析P4HA2的表达情况与肝癌预后的关系，采用qRT-PCR和Western blot检测肝癌细胞和正常肝细胞中P4HA2的表达。构建慢病毒载体，用携带P4HA2 shRNA和Con shRNA的慢病毒载体分别转染肝癌SNU-449和Hep-3B细胞系，建立沉默表达P4HA2的细胞株（shP4HA2组）和对照组细胞株（NC组）。采用CCK-8、集落形成试验、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。采用Western blot实验检测上皮-间质转化和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达情况。结果 在线数据库分析结果显示，肝癌组织中P4HA2表达高于正常肝组织（P＜0.05）。同时，肝癌细胞系中P4HA2 mRNA和蛋白表达水平也高于正常肝细胞（P＜0.01）。慢病毒干扰后，与NC组相比，shP4HA2组中mRNA和蛋白表达水平下降（P＜0.05）。P4HA2基因表达沉默后，细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制。Western blot显示，相对于NC组，shP4HA2组的E-cadherin蛋白表达上升，N-cadherin、Snail蛋白表达下降（P＜0.05），在PI3K/AKT/mTOR通路中，磷酸化的PI3K（P-PI3K）、AKT（P-AKT）和m TOR（P-mTOR）显示出较低的水平（P＜0.05）。结论 P4HA2通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路影响肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭，促进肝癌的发生发展。
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