黑木耳核糖体失活蛋白cDNA 3′-端的克隆与分析

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为了克隆黑木耳核糖体失活蛋白cDNA3′-端,根据随机测得的中间一段蛋白质序列设计街并引物,应用RT—PCR和3′-RACE反应方法,将得到的基因片段与质粒连接,并转化至大肠杆菌中,进行蓝白筛选,再通过琼脂糖凝胶电泳法和PCR法验证白斑,从而得到阳性重组质粒,最后克隆出该目的蛋白基因片段。结果表明,克隆出的cDNA3′-端为330bp的开放阅读框(ORF),编码107个氨基酸和2个终止密码子。经试验证明和文献检索,克隆得到的cDNA3′-端为一种新基因。
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