【摘 要】
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目的 建立一种快速、准确的检测免疫抑制剂常见代谢相关基因多态性的微阵列芯片技术,明确肝移植供、受体细胞色素P450家族细胞色素3A5(cytochrome P450 3A5,CYP3A5)及多药耐
【机 构】
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中山大学附属第三医院肝移植中心,中山大学器官移植研究所,广东省器官移植研究中心,广州,510630中山大学达安基因股份有限公司;
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目的 建立一种快速、准确的检测免疫抑制剂常见代谢相关基因多态性的微阵列芯片技术,明确肝移植供、受体细胞色素P450家族细胞色素3A5(cytochrome P450 3A5,CYP3A5)及多药耐药1(multidrug resistance 1,MDR1)基因多态性对术后患者他克莫司(FK506)浓度/剂量比(C/D)的影响.方法 选取CYP3A5和MDR1基因外显子的8个常见变异基因位点 (CYP3A5 Exon1、Exon2、Exon3、Exon13 和MDR1 Exon1、Exon12、Exon21、Exon26)设计特异性野生型、突变型引物检测探针,通过AD3200微阵列芯片点样仪点样于醛基基片上,室温保湿过夜固定.采用该基因芯片对109份肝移植供、受者全血标本进行检测,每份样本重复检测 3 次,GenePix 4100共聚焦扫描仪阅读芯片,GenePix Pro 410 芯片图像分析软件分析结果,根据同一检测位点野生型探针和突变型探针在阴阳性状态的信号值比值来确定探针的切值(cut-off值).引物探针和样本微阵列芯片检测结果与脱氧核糖核酸(DNA)测序作比对进行验证.进一步分析临床资料完整的32例肝移植患者,比较供、受体CYP3A5和MDR1基因多态性对患者FK506 C/D值的影响.结果 芯片样点分布均匀、清晰、规整度好、无漏点和连点,突变型探针和野生型探针的荧光信号强度区分明显;按照突变型探针和野生型探针的荧光强度比值设定cut-off值,结果易于判断,芯片检测结果与测序结果符合率高达99%.供体 CYP3A5基因Exon3第6986位点 A/G单核苷酸多态性 (CYP3A5*3) 与FK506 C/D值有关,术后2、4、12周供体CYP3A5*1/*1和*1/*3型患者的FK506 C/D值明显低于*3/*3型患者(均为P0.05).结论 供体CYP3A5基因第6986位点携带*1等位基因的患者需更高剂量FK506才能达到目标血药浓度.CYP3A5和MDR1基因多态性的微阵列芯片技术的检测效果理想,可重复性强,为肝移植术后免疫抑制剂的个体化用药提供可靠的参考指标.
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