探讨自然杀伤（NK）细胞的体外扩增及对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞的杀伤作用。

（1）NK细胞的体外扩增及表型鉴定：收集2015年11月北京大学人民医院1名健康志愿者捐赠的外周血20 ml，分离外周血淋巴细胞，采用转染后过度表达白细胞介素21（IL-21）的慢性髓系白血病细胞系K562细胞（IL-21-K562细胞）作为饲养细胞（经放射线照射），与外周血中分离的淋巴细胞混合培养，体外诱导、扩增培养14 d，监测扩增过程中淋巴细胞数量和存活细胞比例的变化，14 d后收获扩增的淋巴细胞并计数，采用流式细胞仪鉴定扩增的淋巴细胞中NK细胞比例（其表型为CD₃-CD₅₆₊）。（2）NK细胞对卵巢癌细胞的杀伤作用：效应细胞（即NK细胞）与靶细胞（即卵巢癌细胞系SKOV3、HOC1A、3AO、CAOV3细胞及其对照K562细胞和正常卵巢上皮细胞系T29细胞）的比值（效靶比）分别为50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1，采用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测NK细胞对卵巢癌细胞的杀伤作用。

（1）NK细胞的体外扩增及表型鉴定结果：体外诱导、扩增培养14 d，淋巴细胞数从扩增当天（第0天）的2.0×10⁷个至第14天时为5.1×10⁹个，扩增后淋巴细胞数增加至扩增前的255倍；存活细胞比例从扩增当天的95%以上降至第8天的80%左右，随后逐渐升高，至第14天时又达95%以上。扩增前、后表型为CD_3-CD₅₆₊的NK细胞占CD_3-的非T淋巴细胞总数的比例分别为2.33%、85.32%，占总淋巴细胞数的比例分别为1.06%、69.42%，扩增前、后分别比较，差异均有统计学意义（P<0.01）。（2）NK细胞对卵巢癌细胞的体外杀伤率：LDH释放实验显示，NK细胞对卵巢癌SKOV3、HOC1A、3AO、CAOV3细胞及其对照K562细胞和T29细胞均有很强的杀伤作用，随着效靶比的增加其杀伤率均明显增高（P<0.01）。当效靶比为1∶1时，NK细胞对K562细胞的杀伤率为37%，而对卵巢癌细胞及T29细胞的杀伤率均在10%左右，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；当效靶比为50∶1和20∶1时，除CAOV3细胞（杀伤率>70%）以外，NK细胞对其他卵巢癌细胞及其对照K562、T29细胞的杀伤率均大于80%，各细胞间比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。

NK细胞能够在体外得到高效扩增，且其对卵巢癌细胞有良好的非特异性杀伤作用。