论文部分内容阅读
目的
构建人类母源性印记基因3(MEG3)的真核表达载体，转染得到过表达的人胰腺癌SW1990细胞株，分析MEG3过表达对SW1990细胞增殖的影响。
方法根据GenBank中MEG3的基因序列，通过化学合成的方法进行全基因合成得到人MEG3基因全长，将其构建入pcDNA3.0真核表达载体中，得到pcDNA3.0-MEG3表达载体，转染胰腺癌细胞SW1990。采用RT-PCR及荧光定量PCR技术检测转染细胞中MEG3基因的表达量。采用MTT试剂盒对转染后SW1990细胞增殖能力的变化进行检测。实验中设转染pcDNA3.0的SW1990细胞为阴性对照组，普通SW1990细胞为空白对照组。
结果成功构建了MEG3真核表达质粒pcDNA3.0-MEG3，并成功转染SW1990细胞。与两对照组相比，转染后细胞的MEG3基因表达量显著提高，提高约895倍(F＝73.592，P<0.01)。MTT检测结果显示，MEG3基因明显抑制SW1990细胞的增殖，实验组72 h时吸光度值为0.81±0.06，与阴性对照组(1.17±0.07)和空白对照组(1.08±0.03)相比，3组差异有统计学意义(F＝33.489，P<0.01)。
结论本研究成功构建了MEG3真核表达质粒pcDNA3.0-MEG3，并证实MEG3基因及其产物对胰腺癌SW1990细胞增殖有明显的抑制作用。