【摘 要】
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目的以柯萨奇病毒B组4型(Coxsackievirus B4, CV-B4)VP1基因的原核表达蛋白作为包被抗原，建立并优化间接ELISA方法，用于CV-B4的抗体检测。方法采用RT-PCR技术扩增CV-B4病毒VP1基因，构建重组表达载体pET-32VP1，并转化至表达菌株大肠埃希菌Rosetta(DE3)，进行IPTG诱导表达，经SDS-PAGE和蛋白质谱鉴定目的蛋白成功表达。以纯化的重组蛋白
【机 构】
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泰山医学院山东省高等学校新发传染病病因流行病学实验室，泰安市 271000,泰山医学院山东省高等学校新发传染病病因流行病学实验室，泰安市 271000,泰山医学院山东省高等学校新发传染病病因流行病学实
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目的以柯萨奇病毒B组4型(Coxsackievirus B4, CV-B4)VP1基因的原核表达蛋白作为包被抗原，建立并优化间接ELISA方法，用于CV-B4的抗体检测。
方法采用RT-PCR技术扩增CV-B4病毒VP1基因，构建重组表达载体pET-32VP1，并转化至表达菌株大肠埃希菌Rosetta(DE3)，进行IPTG诱导表达，经SDS-PAGE和蛋白质谱鉴定目的蛋白成功表达。以纯化的重组蛋白为包被抗原，进行间接ELISA方法反应体系的建立和条件优化。
结果CV-B4的VP1基因可在大肠埃希菌中以包涵体形式稳定表达，确定抗体间接ELISA检测方法的抗原最佳包被浓度为7.5 μg/孔，血清最佳稀释浓度为1∶100，临界值为OD450值≥0.376，重组蛋白可与CV-B4阳性血清特异识别，与CV-B3阳性血清存在一定交叉反应，但与柯萨奇A组病毒以及CV-B1和CV-B5均无反应，表明蛋白具有良好的免疫原性。
结论大肠埃希菌表达的VP1重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性，可用于CV-B4血清抗体的检测。
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