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【摘 要】 通过MTT比色实验、流式细胞仪检测细胞周期研究薇甘菊水提液对K562、Hela细胞的影响。结果表明50μg/mL MMWE作用K562、Hela48 h, 对细胞增殖有促进作用. 其他各浓度水提液均有抑制作用, 且呈明显的时间-剂量关系。
【关键词】 薇甘菊水提液;K562;Hela;抗肿瘤作用
薇甘菊为菊科假泽兰属多年生草质藤本植物, 原产于中南美洲地区,是一种国际公认的有害杂草[3]。
研究发现[4], 薇甘菊水提液和醇提液均可使小鼠CD4+和CD4+/CD8+的值上升,提高小鼠的抗肿瘤的能力. 在非洲和东南亚国家, 薇甘菊作为传统药物, 广泛应用于肿瘤、皮疹等疾病的治疗[5]。本实验通过研究薇甘菊水提液对K562细胞、Hela细胞活性和细胞周期的影响, 探讨其抗肿瘤机制.
1 材料和方法
1.1 材料
薇甘菊采集于深圳大学, 参照煎煮法[6]制备成薇甘菊水提液(MMWE)。
1.2 方法
1.2.1 MTT法检测细胞活力
取对数生长期的K562细胞, Hela细胞, 调整细胞浓度为5×104个/mL、1.7×104个/mL接种入96孔板, 每孔90μL, 终MMWE的浓度分别为50 μg/mL、75 μg/mL、 100 μg/mL、125 μg/mL、200 μg/mL, PBS对照组加入10μL无菌PBS 每组6复孔. MMWE对细胞分别作用48 h, 72 h后,酶标仪检测A570nm光吸收值,计算抑制率。
1.2.2 流式细胞仪检测细胞周期
75μg/mL、125μg/mLMMWE作用48 h,,PI染液重悬, 4℃避光染色30 min, 上机检测.
1.2.3 数据统计
SPSS 11. 5软件进行统计,实验结果以 表示,t检验计算组间差异。
2 结果
2.1 MTT检测结果
实验组MMWE浓度为50 μg/mL,作用K562细胞48h时OD值高于空白对照组,与空白对照组相比,100 μg/mLMMWE处理K562细胞48 h,OD值显著下降(P<0.05),100 μg/mLMMWE作用72 h、125 μg/mL、200 μg/mLMMWE作用48h、72h的OD值与对照组相比较差异极显著(P<0.01)
实验组MMWE浓度为50μg/mL,作用Hela细胞48h时,OD值为高于对照组和各实验组,细胞活力与对照组相比略有上升.其他各实验组OD值均低于对照组。
75 μg/mLMMWE分别处理Hela细胞48 h、72 h, OD值显著低于对照组(P<0.05),100 μg/mL MMWE作用72 h, 125 μg/mL、200 μg/mL MMWE分别作用48 h、72 h, OD值与对照组相比差异均极显著(P<0.01)。
2.2 流式细胞仪检测结果
75μg/mL、125μg/mLMMWE分别处理K562细胞48 h,细胞周期发生明显改变.MMWE处理组G2/M期细胞比例显著增加(P<0.01),G0/G1期、S期细胞比例下降.125 μg/mLMMWE处理K562细胞48 h,细胞凋亡率与对照组相比差异极显著(P<0.01)。
75μg/mL、125μg/mL MMWE处理 Hela细胞48 h,凋亡期、G2/M期细胞量显著增加.G0/G1期和S期细胞量减少.且有明显的剂量依存关系,细胞周期的改变与K562细胞一致。
3 讨论
细胞凋亡与肿瘤的发生、发展及退化有密切的关系.寻找诱导肿瘤细胞凋亡的药物已成为抗瘤药物研究的热点以及评价药物疗效的指标之一。
溶酶体是细胞的主要消化器官,本实验中,K562细胞、Hela细胞的实验组中,次级溶酶体数量显著增多.提示MMWE的抑瘤作用与细胞凋亡有关 [10]。
线粒体也是细胞凋亡的重要元件之一,细胞凋亡早期,内膜由凹向基质侧,但外膜完整无肿胀[12]。这一形态被认为是凋亡早期线粒体内膜和嵴的典型构形,细胞受到凋亡刺激后,线粒体的形态均会发生这种改变。
MMWE作用两种肿瘤细胞后,实验组中处于G2/M期的细胞比例显著增加。当药物作用后的细胞无法克服G2/M期阻滞时,本研究发现,MMWE通过抑制细胞有丝分裂,抑制肿瘤细胞增殖并诱导凋亡。
参考文献
[3]胡玉佳, 毕培曦. 薇甘菊的生活史及其对除莠剂的反应[J].中山大学学报, 1994,33 (4): 88-95.
[4]吴玉荷, 张仁利, 胡章立. 薇甘菊次生代谢产物的免疫学活性研究[J].天然产物研究与开发, 2005, 17 (3): 1-4.
[5]Mohammed Bakir, Petrea C. Facey, Ishmael Hassan等 牙買加薇甘菊中的薇甘菊内酯[J]晶体学报2004, 60: 798-800.
[6] 肖蕾, 胡青松, 李琳. 中药有效成分提取分离技术研究进展[J].中药材.2002,25(11):826-828
[10]Rosa A. González-Polo, Mireia Niso-Santano, Miguel A. Ortíz-Ortíz等百草枯诱导的自噬作用加快神经母细胞瘤SH - SY5Y的凋亡[J]. 细胞分子生物学, 2005, 25(3) :1025-1040.
[12]Scorrano L, Ashiya M, Buttle K等. 线粒体嵴和细胞色素c的信号通路在细胞凋亡中的改变[J]. 细胞进展, 2002,2(1): 55-67.
【关键词】 薇甘菊水提液;K562;Hela;抗肿瘤作用
薇甘菊为菊科假泽兰属多年生草质藤本植物, 原产于中南美洲地区,是一种国际公认的有害杂草[3]。
研究发现[4], 薇甘菊水提液和醇提液均可使小鼠CD4+和CD4+/CD8+的值上升,提高小鼠的抗肿瘤的能力. 在非洲和东南亚国家, 薇甘菊作为传统药物, 广泛应用于肿瘤、皮疹等疾病的治疗[5]。本实验通过研究薇甘菊水提液对K562细胞、Hela细胞活性和细胞周期的影响, 探讨其抗肿瘤机制.
1 材料和方法
1.1 材料
薇甘菊采集于深圳大学, 参照煎煮法[6]制备成薇甘菊水提液(MMWE)。
1.2 方法
1.2.1 MTT法检测细胞活力
取对数生长期的K562细胞, Hela细胞, 调整细胞浓度为5×104个/mL、1.7×104个/mL接种入96孔板, 每孔90μL, 终MMWE的浓度分别为50 μg/mL、75 μg/mL、 100 μg/mL、125 μg/mL、200 μg/mL, PBS对照组加入10μL无菌PBS 每组6复孔. MMWE对细胞分别作用48 h, 72 h后,酶标仪检测A570nm光吸收值,计算抑制率。
1.2.2 流式细胞仪检测细胞周期
75μg/mL、125μg/mLMMWE作用48 h,,PI染液重悬, 4℃避光染色30 min, 上机检测.
1.2.3 数据统计
SPSS 11. 5软件进行统计,实验结果以 表示,t检验计算组间差异。
2 结果
2.1 MTT检测结果
实验组MMWE浓度为50 μg/mL,作用K562细胞48h时OD值高于空白对照组,与空白对照组相比,100 μg/mLMMWE处理K562细胞48 h,OD值显著下降(P<0.05),100 μg/mLMMWE作用72 h、125 μg/mL、200 μg/mLMMWE作用48h、72h的OD值与对照组相比较差异极显著(P<0.01)
实验组MMWE浓度为50μg/mL,作用Hela细胞48h时,OD值为高于对照组和各实验组,细胞活力与对照组相比略有上升.其他各实验组OD值均低于对照组。
75 μg/mLMMWE分别处理Hela细胞48 h、72 h, OD值显著低于对照组(P<0.05),100 μg/mL MMWE作用72 h, 125 μg/mL、200 μg/mL MMWE分别作用48 h、72 h, OD值与对照组相比差异均极显著(P<0.01)。
2.2 流式细胞仪检测结果
75μg/mL、125μg/mLMMWE分别处理K562细胞48 h,细胞周期发生明显改变.MMWE处理组G2/M期细胞比例显著增加(P<0.01),G0/G1期、S期细胞比例下降.125 μg/mLMMWE处理K562细胞48 h,细胞凋亡率与对照组相比差异极显著(P<0.01)。
75μg/mL、125μg/mL MMWE处理 Hela细胞48 h,凋亡期、G2/M期细胞量显著增加.G0/G1期和S期细胞量减少.且有明显的剂量依存关系,细胞周期的改变与K562细胞一致。
3 讨论
细胞凋亡与肿瘤的发生、发展及退化有密切的关系.寻找诱导肿瘤细胞凋亡的药物已成为抗瘤药物研究的热点以及评价药物疗效的指标之一。
溶酶体是细胞的主要消化器官,本实验中,K562细胞、Hela细胞的实验组中,次级溶酶体数量显著增多.提示MMWE的抑瘤作用与细胞凋亡有关 [10]。
线粒体也是细胞凋亡的重要元件之一,细胞凋亡早期,内膜由凹向基质侧,但外膜完整无肿胀[12]。这一形态被认为是凋亡早期线粒体内膜和嵴的典型构形,细胞受到凋亡刺激后,线粒体的形态均会发生这种改变。
MMWE作用两种肿瘤细胞后,实验组中处于G2/M期的细胞比例显著增加。当药物作用后的细胞无法克服G2/M期阻滞时,本研究发现,MMWE通过抑制细胞有丝分裂,抑制肿瘤细胞增殖并诱导凋亡。
参考文献
[3]胡玉佳, 毕培曦. 薇甘菊的生活史及其对除莠剂的反应[J].中山大学学报, 1994,33 (4): 88-95.
[4]吴玉荷, 张仁利, 胡章立. 薇甘菊次生代谢产物的免疫学活性研究[J].天然产物研究与开发, 2005, 17 (3): 1-4.
[5]Mohammed Bakir, Petrea C. Facey, Ishmael Hassan等 牙買加薇甘菊中的薇甘菊内酯[J]晶体学报2004, 60: 798-800.
[6] 肖蕾, 胡青松, 李琳. 中药有效成分提取分离技术研究进展[J].中药材.2002,25(11):826-828
[10]Rosa A. González-Polo, Mireia Niso-Santano, Miguel A. Ortíz-Ortíz等百草枯诱导的自噬作用加快神经母细胞瘤SH - SY5Y的凋亡[J]. 细胞分子生物学, 2005, 25(3) :1025-1040.
[12]Scorrano L, Ashiya M, Buttle K等. 线粒体嵴和细胞色素c的信号通路在细胞凋亡中的改变[J]. 细胞进展, 2002,2(1): 55-67.