【摘 要】
：
目的 制备抗刚地弓形虫前纤维蛋白(TgPRF)的多克隆抗体,初步研究其对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响. 方法 提取刚地弓形虫RH株RNA、扩增TgPRF基因,并构建pET-3
【机 构】
：
遵义医学院珠海校区免疫学教研室,珠海,519041
论文部分内容阅读
目的 制备抗刚地弓形虫前纤维蛋白(TgPRF)的多克隆抗体,初步研究其对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响. 方法 提取刚地弓形虫RH株RNA、扩增TgPRF基因,并构建pET-30a(+)-TgPRF重组质粒,将其转化至大肠埃希菌BL21 (DE3)感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定蛋白表达情况.目的蛋白经AKTA系统进行亲和层析纯化和超滤浓缩后进行蛋白质印迹分析(Western blotting).将2 mg纯化的重组蛋白TgPRF与等体积弗氏完全佐剂混合乳化后,背部皮下多点注射免疫新西兰兔2只,首次免疫后每隔2周,用1 mg纯化的重组蛋白TgPRF与等体积弗氏不完全佐剂加强免疫3次,末次免疫后10 d心脏采血.免疫后血清进行Western blotting鉴定及ELISA抗体效价检测.将胚胎成纤维细胞接种于96孔板中(4×103个细胞/孔),并加入104个刚地弓形虫速殖子(RH-GFP).设空白对照组(A组),抗体干预组(B1、B2和B3组),阴性血清组(C组).B1、B2和B3组分别加入1∶20、1∶80、1∶200稀释的抗TgPRF兔血清100 μl;C组加入1∶20稀释的免疫前兔血清100μl,每组均设3个复孔.培养72 h后荧光显微镜观察,通过Image pro 6.0软件分析虫体增殖情况.采用SPSS13.0软件进行统计学分析. 结果 PCR扩增TgPRF基因片段为510 bp,pET-30a(+)-TgPRF经测序与目的序列完全一致.经IPTG诱导表达,TgPRF蛋白相对分子质量(Mr)约为25 000,且高表达条带主要存在于上清中.TgPRF蛋白经纯化浓缩后浓度为4 mg/ml,Western blotting分析显示,在Mr 25 000处出现特异性条带.经细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测,抗TgPRF血清对胚胎成纤维细胞未见毒性损伤.ELISA检测抗TgPRF血清抗体效价＞1∶105;各实验组细胞于感染24h时,A组(0.62±0.23)及C组(0.74±0.25)相对虫体数量高于B1组(0.35±0.16) (P＜ 0.05),但与B2和B3组间差异无统计学意义(P＞0.05),B1～B3组虫体增殖抑制率分别为43.5％、11.4％、3.6％.感染48 h时,A组(3.61±0.66)与C组(3.38±0.78)相对虫体数量明显高于B1～B3组(P＜ 0.01),而B1组(1.09±0.58)与B2组(1.92±0.73)低于B3组(2.47±0.84) (P＜0.05),B1～B3组虫体增殖抑制率分别增高至69.9％、46.9％、31.7％;感染72 h时,A组(19.90±3.92)与C组(20.61±4.07)相对虫体数量高于B1组(5.58±2.43)与B2组(8.06±2.66) (P＜0.01),B3组(16.02±6.46)明显升高.B1～B3组抑制率分别为72.0％、59.5％、19.5％. 结论 弓形虫TgPRF蛋白能有效刺激新西兰兔产生抗体,且TgPRF兔血清抗体在体外能有效抑制弓形虫速殖子在小鼠胚胎成纤维细胞中的增殖并呈现明显的量效关系,但并不能完全消除虫体.
其他文献
【摘要】目的观察剖宫产术后应用硬膜外镇痛泵对恢复的影响。方法将随机抽取的200名剖宫产孕妇分为观察组和对照组两组，每组100例。观察组使用硬膜外自控镇痛泵，对照组使用传统镇痛方法，对比两组镇痛效果、肛门排气时间、早期泌乳时间及肠蠕动恢复情况。结果观察组镇痛效果、肛门排气时间、早期泌乳时间及肠蠕动恢复情况均优于对照组。结论剖宫产术后应用硬模外镇痛泵可以有效镇痛，可使孕妇早泌乳，促进肛门排气，促进肠蠕
【摘 要】目的：通过对临床医学专业少数名族专科（民专）医学生实施妇产科课程PBL教学改革，观察其教学效果，探讨临床医学专业（民专）班级妇产科学课程PBL教学改革的可行性，并发现和分析教学过程中存在的问题。方法：将临床医学（民专）班90名学生通过随机数字表随机分为2组，实验组50人与对照组40人，实验组采用PBL教学法，对照组采用传统教学法。结果：民专班的实验组学生对PBL教学评价均较高，其中PBL
【摘要】目的探讨腹腔镜部分胆囊切除术在治疗化脓、坏疽性胆囊炎等复杂胆囊结石的临床疗效及操作方案的选择。方法回顾分析笔者所在医院在2006年1月——2013年1月期间，针对化脓、坏疽性胆囊炎实施腹腔镜部分胆囊切除术病例25例，实施开腹胆囊切除30例，分析两组手术方式在手术时间、并发症、住院治疗费用，住院时间等方面，探讨腹腔镜部分胆囊切除术式的应用具体操作体会及临床效果。结果腹腔镜胆囊切除这种方法的应
【摘要】 目的 探讨左氧氟沙星注射液发生不良反应的相关性因素。方法 选取2009年2月至2012年6月在我院接受左氧氟沙星注射液治疗后出现不良反应的50例患者作为研究对象，进行相关性因素分析。结果 本组50例患者中，男女比例为1.38：1；主要发生年龄段为20-39岁（23例）；主要的原患疾病为上呼吸道感染，占38%；23例在用药10min-29min内发生不良反应发生；10例主诉有既往用药过敏史
目的:系统分析经皮脊柱内镜技术与传统开放手术治疗腰椎间盘突出症的相关的并发症发生率及其特点.方法:两位作者独立对MEDLINE、Cochrane library、Pubmed数据库、Web of Sci
【中图分类号】R575.5 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）07-4631-01 随着社会的发展，人们对护理服务质量的要求越来越高，护士做为健康的维护者其自身的心理健康受到广泛关注。据调查分析，工作在临床一线的护士都不同程度的存在心理障碍，导致身体素质下降，工作效率降低。从心理学角度分析，此现象与护士的工作压力，社会支持以及护士的个性心理特征等方面有密切联系。职业不被
【摘要】目的探讨阑尾切除术后并发肠外瘘的原因以及如何进行防治。方法分析2008年5月以来在我院进行阑尾切除术后出现肠外瘘的12例患者的临床资料，总结经验。结果回盲部炎症、医源性损伤以及肠梗阻是常见原因。结论有效的术前准备以及术后预防是关键。 【关键词】阑尾切除；肠外瘘；原因分析；预防 阑尾切除术是腹部外科最常见的一种手术，但术后并发症较多，文献报道发生率为10%-20%，而肠外瘘是其最严重的并
【摘要】 目的 探讨采用康妇消炎栓联合保妇康栓治疗宫颈炎的临床疗效。方法 随机选取2009年10月——2012年12月期间我院收治的确诊为宫颈炎的患者80例，按照治疗方法的不同随机分配为实验组和对照组，实验组患者40例采用康妇消炎栓联合保妇康栓进行治疗，对照组40例患者采用单一的保妇康栓进行治疗，对两组患者的临床疗效进行对比分析。结果 实验组患者的治疗总有效率为98.21%，显著高于对照组77.6