非洲猪瘟病毒核酸双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的构建

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研究在利用世界动物卫生组织(OIE)推荐的TaqMan荧光定量PCR方法基础上,增加内标物TaqMan荧光,通过优化反应体系及条件,进行Real-time PCR扩增,建立了一种快速、准确、特异性好的非洲猪瘟病毒核酸双重TaqMan探针荧光定量PCR技术,并进行敏感性、稳定性和特异性评价及比较。结果显示:荧光定量PCR标准曲线线性关系良好,R2值可达到1,敏感性最低能检测到28个拷贝数/μL,比常规PCR方法高40~80倍;通过5份标准质粒重复检测3次,每一个样品重复检测Ct值一致,稳定性良好,变异系数范
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