酵母双杂交技术筛选与HBeAg结合的胰腺细胞蛋白

来源 :中国人兽共患病学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangxu0202
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目的 应用酵母双杂交技术筛选人类胰腺细胞cDNA文库中与HBeAg相互作用的结合蛋白.方法 醋酸锂法将诱饵质粒pGBKT7-HBeAg转化酵母菌AH109;同时扩增纯化人胰腺细胞cDNA文库并转化酵母菌株Y187.应用酵母双杂交系统3将二者进行配合,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和X-α-gal上进行双重筛选.提取阳性菌落质粒并电击转化感受态大肠埃希菌DH5α,BglⅡ酶切鉴定及与诱饵质粒的共转化回交实验验证,将阳性克隆测序并在GenBank里进行同源性比对和生物信息学分析.
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