Ⅳ型胶原的提取纯化与抗血清的制备

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Ⅳ型胶原(Ⅳ.C)是基底膜的主要组成部分.人胎盘经胃蛋白酶消化,氯化钠分级盐析沉淀后,进一步经过DEAE-52和CM-52柱层析纯化制各Ⅳ.C.氨基酸分析表明甘氨酸含量占30%,羟脯氨酸占13%,两个α链的分子量分别在95000和70000,与Timpl报道相似,符合Ⅳ.C特征.将充分溶解的Ⅳ.C与等体积的完全Freund佐剂混合致敏新西兰大白兔制备抗血清,用放免和间接血凝法测定抗体效价分别为1:1200和1:512。与Ⅲ型前胶原和层粘连蛋白无明显交叉反应。Ⅳ.C经(125)Ⅰ标记,以固相二抗作为分离剂可建立血清中Ⅳ.C放射免疫测定方法。
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