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目的
探讨茶多酚对人皮肤成纤维细胞(HSF)Nrf2/Bach1 mRNA及Nrf2/Bach1核蛋白表达分布的影响。
方法不同浓度茶多酚(0、2.5、5、10、20、40 mg/L)孵育HSF 24 h,MTT法检测细胞增殖活性,筛选出适宜浓度茶多酚,并用该浓度药物孵育HSF 24 h,RT-qPCR法检测Nrf2和Bach1 mRNA表达,Western印迹法检测Nrf2、Bach1核蛋白表达,免疫荧光法检测Nrf2、Bach1蛋白核分布情况。
结果MTT法检测显示,当茶多酚浓度为5 mg/L时,对HSF增殖无明显影响,故后续实验采用5 mg/L茶多酚,对照组浓度为0。HSF加入茶多酚孵育后,Bach1 mRNA相对表达量(0.629 ± 0.077)低于对照组(0.940 ± 0.033,t = 6.397,P < 0.05),Nrf2 mRNA(1.467 ± 0.076)高于对照组(0.977 ± 0.091,t = 7.133,P < 0.05);Nrf2核蛋白表达(6.929 ± 0.121)高于对照组(3.537 ± 0.126,t = 33.636,P < 0.05),而Bach1核蛋白(1.424 ± 0.171)低于对照组(16.966 ± 1.702,t = 15.730,P < 0.05)。免疫荧光结果显示,Nrf2蛋白在细胞核内的聚集增多,Bach1蛋白在细胞核内聚集减少。
结论茶多酚可促进Nrf2 mRNA、Nrf2核蛋白的表达及核分布,抑制Bach1 mRNA、Bach1核蛋白的表达和核分布,从而发挥抗氧化作用。