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【摘要】目的：研究苗药复方窝来溜溶液的抗菌活性。方法：以复方窝来溜溶液为研究对象，在实验室内对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌进行抑菌试验。结果：苗药复方窝来溜溶液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的平均抑菌率都达到10000%。结论：苗药复方窝来溜溶液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌具有较强的抑制作用。
【关键词】苗药复方窝来溜；蜘蛛香；抗菌
【中图分类号】R2855【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）10-0021-02
Abstract：Objective To study the antimicrobial activity of the Mao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution in laboratory. Methods Take Mao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution as the reseach object， the antibacterial test of Escherichia coli， Staphylococcus aureus and Candida albicans was carried out in laboratory. Results Antibacterial test showed that the inhibitory rate of Escherichia coli， Staphylococcus aureus and Candida albicans was 100% on average. Conclusion Miao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution has a strong inhibitory effect on Escherichia coli， Staphylococcus aureus and Candida albicans.
Keywords：Miao Nationality Medicine compound wo-lai-liu； Valeriana wallichii DC ；V.jatamansiJones； Antibacterial test
苗药复方窝来溜溶液为苗药蜘蛛香、桂枝、桑枝、松叶等制成的复方溶液剂。主要药物蜘蛛香（Valeriana wallichii DC，Vjatamansi Jones）又名马蹄香、老虎七、土细辛、印度缬草等，具有理气和中，散寒除湿，活血消肿的功效。临床用于脘腹胀痛、呕吐泄泻、小儿疳积、风寒湿痹、肺气水肿、月经不调和跌打损伤，外用于治疗疮疖等。为使苗药复方窝来溜溶液剂作为健康产品用于相关人群，依据卫生部GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》[1]规定的标准，对苗药复方窝来溜溶液剂进行抗菌作用试验，现将结果报告如下。
1仪器与材料
11仪器HHB11500电热恒温培养箱9060749。
12材料复方窝来溜溶液剂（批号：20140407，贵州苗侗百草医药发展有限公司）。大肠杆菌（8099）、金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、白色念珠菌（ATCC 10231）由中国普通微生物菌种保藏管理中心提供，试验使用第6～7代37℃培养18～24h。所用试剂均为分析纯。
2方法
21微生物污染检测采用GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录B“产品微生物检测方法”作为检测依据。试验温度204℃、湿度43%，实验室洁净度为百级，用无菌方法打开同批号的3瓶包装，从每瓶包装中取原液混合做样液备用。①细菌菌落总数检测：共接种5个平皿，每个平皿中加入1ml样液，然后用冷却至45℃左右的熔化的营养琼脂培养基15～20ml倒入每个平皿内混合均匀，待琼脂凝固后翻转平皿置（35±2）℃培养48h后，计算平板上的菌落数。②大肠菌群检测：取样液5ml，接种50ml乳糖胆盐发酵管，置（35±2）℃培养24h，观察产酸产气情况。③金黄色葡萄球菌检测：取样液5ml，加入到50ml SCDLP培养液中，充分混匀，置（35±2）℃培养24h。自上述增菌液中取1～2接种环，划线接种在血琼脂培养基上，置（35±2）℃培养24～48h，在血琼脂平板上观察菌落特征。④溶血性链球菌检测：取样液5ml，加入到50ml葡萄糖肉汤，（35±2）℃培养24h。将培养物划线接种血琼脂平板，（35±2）℃培养24h观察菌落特征。⑤绿脓杆菌检测：取样液5ml，加入到50ml SCDLP培养液中，充分混匀，置（35±2）℃培养18～24h，观察培养液表面情况。⑥真菌菌落总数检测方法：接种五个平皿，每个平皿中加入1ml样液，然后用冷却至45℃左右的熔化的沙氏琼脂培养基15～25ml倒入每个平皿内混合均匀，琼脂凝固后翻转平皿置（25±2）℃培养7天，分别于3、5、7天观察，计算平板上的菌落数。
22抗菌试验采用GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C4“溶出性抗（抑）菌产品抑菌性能试验方法”为依据，试验温度（20±1）℃。将试验菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液（要求的浓度为：用100μl滴于5ml样液内，回收菌数为1×104～9×104cfu/ml）。取被试样液（5ml）和对照样液（与试样同质材料，同等大小，但不含抗菌材料，且经灭菌处理）各4管。取上述菌悬液，分别在每个被试样液和对照样液内滴加100μl，均匀混合，开始计时，作用2、5、10、20min，用无菌镊分别将样液（05ml）投入含5ml PBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2～3个稀释度，分别吸取05ml，置于两个平皿，用凉至40～45℃的营养琼脂培养基（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）或沙氏琼脂培养基（白色念珠菌）15ml做倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，培养48h（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）或72h（白色念珠菌），做活菌菌落计数。试验重复三次。按下式计算抑菌率：X=（A-B）/A×100%（式中，X为抑菌率，%；A为对照品平均菌落数；B为被试品平均菌落数。） 23判断标准①细菌菌落总数检测结果判定，菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。将复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都不超过200cfu/ml，则被检样品合格，如其中有任何1次结果平均值超过200cfu/ml，则判定被检样品不合格。②大肠菌群检测结果判定，如乳糖胆盐发酵管不产酸产气，可判定为大肠菌群阴性，凡乳糖胆盐发酵管产酸产气，在伊红美兰平板上培养有典型大肠菌落，可报告被检样品检出大肠杆菌。③金黄色葡萄球菌检测结果判定：在血琼脂平板上有金色葡萄球菌生长的，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。④溶血性链球菌检测结果判定：在血琼脂平板上有溶血性链球菌生长的，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。⑤绿脓杆菌检测结果判定，如培养液表面呈现一层薄菌膜，培养液呈黄绿色或蓝绿色，则从培养液薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲溴化铵琼脂平板培养，有绿脓杆菌生长的，可报告被检样品中检出绿脓杆菌。⑥真菌菌落检测结果判定：当沙氏培养基上的菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。如样品真菌菌落总数超过100cfu/ml，复检2次，2次结果都不超过100cfu/ml，则判定被检样品合格，其中有任何1次结果超过100cfu/ml，则判定被检样品不合格。⑦抗菌试验结果判定，抑菌率≥50%～90%，产品有抑菌作用，抑菌率≥90%，产品有较强抑菌作用。
3结果
31检测结果复方窝来溜溶液经检测细菌菌落总数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌、真菌菌落总数均符合GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》的要求，见表1。
32抑菌效果经三次重复试验，结果表明：在（20±1）℃条件下，苗药复方窝来溜溶液剂原液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌作用2min，平均抑菌率达10000%，表明产品具有较强的抑菌作用。见表2、3、4。
4讨论
苗药复方窝来溜溶液经微生物污染检测，产品符合GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》的规定。在（20±1）℃的条件下，苗药复方窝来溜溶液原液分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌作用2min，平均抑菌率均达10000%。说明苗药复方窝来溜溶液剂原液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌具有较强的抑菌作用。
苗药复方窝来溜中的主要成分蜘蛛香具有广泛的药理活性，蜘蛛香所含的环烯醚萜类成分具有抗肿瘤、镇静催眠、抗焦虑、解痉等作用[2]。曹斌[3]等证明蜘蛛香可显著延长戊巴比妥钠小鼠睡眠时间，明显减少醋酸所致的小鼠扭体反应次数，具有镇静、催眠、抗惊厥和一定的镇痛作用；郜红利[4]等证明蜘蛛香中的总黄酮类成分具有镇痛、改善胃肠运动的作用；蜘蛛香有抗前列腺增生、抗菌及抗病毒等作用[5]。此外，蜘蛛香的挥发油成分对芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌有明显的抑制作用[6]。动物实验表明，蜘蛛香无明显的药物依赖作用和毒性作用[6]，因此具有天然、毒性低、药理作用广泛的特点。以蜘蛛香为主要成分的苗药窝来溜在黔东南地区苗族民间常外用于祛风湿、活血、强力等。研究结果进一步佐证了将苗药窝来溜制成的溶液剂可对常见致病菌如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌具有较强的抑菌作用。
参考文献
[1] GB15979-2002. 一次性使用卫生用品卫生标准。
[2] 李少华，闫智勇.蜘蛛香环烯醚萜类成分的研究进展[J].中国新药杂志，2012，21（6）：633-637.
[3] 曹斌，洪庚辛.蜘蛛香的中枢抑制作用[J].中国中药杂志，1994，19（1）：40.
[4] 郜红利，谭玉柱.蜘蛛香提取物的药理学研究[J].华西药学杂志，2014，29（2）：154-157.
[5] 李蓉，吴莹. 蜘蛛香的药理作用研究进展[J].科技资讯，2009，（31）： 159.
[6] 陈畅，李韶菁，唐仕欢，等.蜘蛛香药理研究进展[J].中国中药杂志，2012，37（14）：2174-2177.
（收稿日期：20160316）
【关键词】苗药复方窝来溜；蜘蛛香；抗菌
【中图分类号】R2855【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）10-0021-02
Abstract：Objective To study the antimicrobial activity of the Mao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution in laboratory. Methods Take Mao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution as the reseach object， the antibacterial test of Escherichia coli， Staphylococcus aureus and Candida albicans was carried out in laboratory. Results Antibacterial test showed that the inhibitory rate of Escherichia coli， Staphylococcus aureus and Candida albicans was 100% on average. Conclusion Miao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution has a strong inhibitory effect on Escherichia coli， Staphylococcus aureus and Candida albicans.
Keywords：Miao Nationality Medicine compound wo-lai-liu； Valeriana wallichii DC ；V.jatamansiJones； Antibacterial test
苗药复方窝来溜溶液为苗药蜘蛛香、桂枝、桑枝、松叶等制成的复方溶液剂。主要药物蜘蛛香（Valeriana wallichii DC，Vjatamansi Jones）又名马蹄香、老虎七、土细辛、印度缬草等，具有理气和中，散寒除湿，活血消肿的功效。临床用于脘腹胀痛、呕吐泄泻、小儿疳积、风寒湿痹、肺气水肿、月经不调和跌打损伤，外用于治疗疮疖等。为使苗药复方窝来溜溶液剂作为健康产品用于相关人群，依据卫生部GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》[1]规定的标准，对苗药复方窝来溜溶液剂进行抗菌作用试验，现将结果报告如下。
1仪器与材料
11仪器HHB11500电热恒温培养箱9060749。
12材料复方窝来溜溶液剂（批号：20140407，贵州苗侗百草医药发展有限公司）。大肠杆菌（8099）、金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、白色念珠菌（ATCC 10231）由中国普通微生物菌种保藏管理中心提供，试验使用第6～7代37℃培养18～24h。所用试剂均为分析纯。
2方法
21微生物污染检测采用GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录B“产品微生物检测方法”作为检测依据。试验温度204℃、湿度43%，实验室洁净度为百级，用无菌方法打开同批号的3瓶包装，从每瓶包装中取原液混合做样液备用。①细菌菌落总数检测：共接种5个平皿，每个平皿中加入1ml样液，然后用冷却至45℃左右的熔化的营养琼脂培养基15～20ml倒入每个平皿内混合均匀，待琼脂凝固后翻转平皿置（35±2）℃培养48h后，计算平板上的菌落数。②大肠菌群检测：取样液5ml，接种50ml乳糖胆盐发酵管，置（35±2）℃培养24h，观察产酸产气情况。③金黄色葡萄球菌检测：取样液5ml，加入到50ml SCDLP培养液中，充分混匀，置（35±2）℃培养24h。自上述增菌液中取1～2接种环，划线接种在血琼脂培养基上，置（35±2）℃培养24～48h，在血琼脂平板上观察菌落特征。④溶血性链球菌检测：取样液5ml，加入到50ml葡萄糖肉汤，（35±2）℃培养24h。将培养物划线接种血琼脂平板，（35±2）℃培养24h观察菌落特征。⑤绿脓杆菌检测：取样液5ml，加入到50ml SCDLP培养液中，充分混匀，置（35±2）℃培养18～24h，观察培养液表面情况。⑥真菌菌落总数检测方法：接种五个平皿，每个平皿中加入1ml样液，然后用冷却至45℃左右的熔化的沙氏琼脂培养基15～25ml倒入每个平皿内混合均匀，琼脂凝固后翻转平皿置（25±2）℃培养7天，分别于3、5、7天观察，计算平板上的菌落数。
22抗菌试验采用GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C4“溶出性抗（抑）菌产品抑菌性能试验方法”为依据，试验温度（20±1）℃。将试验菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液（要求的浓度为：用100μl滴于5ml样液内，回收菌数为1×104～9×104cfu/ml）。取被试样液（5ml）和对照样液（与试样同质材料，同等大小，但不含抗菌材料，且经灭菌处理）各4管。取上述菌悬液，分别在每个被试样液和对照样液内滴加100μl，均匀混合，开始计时，作用2、5、10、20min，用无菌镊分别将样液（05ml）投入含5ml PBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2～3个稀释度，分别吸取05ml，置于两个平皿，用凉至40～45℃的营养琼脂培养基（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）或沙氏琼脂培养基（白色念珠菌）15ml做倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，培养48h（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）或72h（白色念珠菌），做活菌菌落计数。试验重复三次。按下式计算抑菌率：X=（A-B）/A×100%（式中，X为抑菌率，%；A为对照品平均菌落数；B为被试品平均菌落数。） 23判断标准①细菌菌落总数检测结果判定，菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。将复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都不超过200cfu/ml，则被检样品合格，如其中有任何1次结果平均值超过200cfu/ml，则判定被检样品不合格。②大肠菌群检测结果判定，如乳糖胆盐发酵管不产酸产气，可判定为大肠菌群阴性，凡乳糖胆盐发酵管产酸产气，在伊红美兰平板上培养有典型大肠菌落，可报告被检样品检出大肠杆菌。③金黄色葡萄球菌检测结果判定：在血琼脂平板上有金色葡萄球菌生长的，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。④溶血性链球菌检测结果判定：在血琼脂平板上有溶血性链球菌生长的，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。⑤绿脓杆菌检测结果判定，如培养液表面呈现一层薄菌膜，培养液呈黄绿色或蓝绿色，则从培养液薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲溴化铵琼脂平板培养，有绿脓杆菌生长的，可报告被检样品中检出绿脓杆菌。⑥真菌菌落检测结果判定：当沙氏培养基上的菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。如样品真菌菌落总数超过100cfu/ml，复检2次，2次结果都不超过100cfu/ml，则判定被检样品合格，其中有任何1次结果超过100cfu/ml，则判定被检样品不合格。⑦抗菌试验结果判定，抑菌率≥50%～90%，产品有抑菌作用，抑菌率≥90%，产品有较强抑菌作用。
3结果
31检测结果复方窝来溜溶液经检测细菌菌落总数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌、真菌菌落总数均符合GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》的要求，见表1。
32抑菌效果经三次重复试验，结果表明：在（20±1）℃条件下，苗药复方窝来溜溶液剂原液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌作用2min，平均抑菌率达10000%，表明产品具有较强的抑菌作用。见表2、3、4。
4讨论
苗药复方窝来溜溶液经微生物污染检测，产品符合GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》的规定。在（20±1）℃的条件下，苗药复方窝来溜溶液原液分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌作用2min，平均抑菌率均达10000%。说明苗药复方窝来溜溶液剂原液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌具有较强的抑菌作用。
苗药复方窝来溜中的主要成分蜘蛛香具有广泛的药理活性，蜘蛛香所含的环烯醚萜类成分具有抗肿瘤、镇静催眠、抗焦虑、解痉等作用[2]。曹斌[3]等证明蜘蛛香可显著延长戊巴比妥钠小鼠睡眠时间，明显减少醋酸所致的小鼠扭体反应次数，具有镇静、催眠、抗惊厥和一定的镇痛作用；郜红利[4]等证明蜘蛛香中的总黄酮类成分具有镇痛、改善胃肠运动的作用；蜘蛛香有抗前列腺增生、抗菌及抗病毒等作用[5]。此外，蜘蛛香的挥发油成分对芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌有明显的抑制作用[6]。动物实验表明，蜘蛛香无明显的药物依赖作用和毒性作用[6]，因此具有天然、毒性低、药理作用广泛的特点。以蜘蛛香为主要成分的苗药窝来溜在黔东南地区苗族民间常外用于祛风湿、活血、强力等。研究结果进一步佐证了将苗药窝来溜制成的溶液剂可对常见致病菌如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌具有较强的抑菌作用。
参考文献
[1] GB15979-2002. 一次性使用卫生用品卫生标准。
[2] 李少华，闫智勇.蜘蛛香环烯醚萜类成分的研究进展[J].中国新药杂志，2012，21（6）：633-637.
[3] 曹斌，洪庚辛.蜘蛛香的中枢抑制作用[J].中国中药杂志，1994，19（1）：40.
[4] 郜红利，谭玉柱.蜘蛛香提取物的药理学研究[J].华西药学杂志，2014，29（2）：154-157.
[5] 李蓉，吴莹. 蜘蛛香的药理作用研究进展[J].科技资讯，2009，（31）： 159.
[6] 陈畅，李韶菁，唐仕欢，等.蜘蛛香药理研究进展[J].中国中药杂志，2012，37（14）：2174-2177.
（收稿日期：20160316）