【摘 要】
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目的构建甲型SWH1N1流感病毒核蛋白(NP)的杆状病毒真核表达载体,转染sf9细胞表达并纯化其编码蛋白。方法从江苏SWH1N1流感病毒毒株(A/Jiangsu/1/2009(H1N1))提取病毒RNA,采用
【机 构】
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江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所,卫生部肠道病原微生物重点实验室,
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目的构建甲型SWH1N1流感病毒核蛋白(NP)的杆状病毒真核表达载体,转染sf9细胞表达并纯化其编码蛋白。方法从江苏SWH1N1流感病毒毒株(A/Jiangsu/1/2009(H1N1))提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NP基因,将其克隆至pMD18-TSimple Vector中构建pMD18-T/NP质粒,双酶切pMD18-T/NP与p-fast后,连接构建真核表达载体p-fast-NP,转化DH10Bac细胞,转座构建杆状病毒NP-Bacmid,经酶切及测序鉴定后将NP-Bacmid转染到sf9细胞中,通过免疫印迹法鉴定NP蛋白的表达,采用亲和层析法纯化NP蛋白。结果经双酶切、测序鉴定证实NP基因的真核表达载体构建成功;免疫印迹法证实NP基因的表达;纯化获得了高纯度的NP蛋白。结论成功克隆了NP基因,并构建了其杆状病毒真核表达载体,该表达载体的构建为后期的流感病毒快速检测以及基因工程疫苗制备奠定了良好的基础。
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