【摘 要】
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目的构建人附睾蛋白酶抑制蛋白（epididymal protease inhibitor,eppin）基因原核表达质粒,表达并纯化重组蛋白,并探讨其抗原性及应用价值。方法以健康人睾丸组织cDNA为模板进行P
【机 构】
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第三军医大学附属西南医院妇产科,第三军医大学检验系临床生化室,第三军医大学全军免疫研究所,
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目的构建人附睾蛋白酶抑制蛋白（epididymal protease inhibitor,eppin）基因原核表达质粒,表达并纯化重组蛋白,并探讨其抗原性及应用价值。方法以健康人睾丸组织cDNA为模板进行PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pET-32a,并转化大肠埃希菌BL21（DE3）,异丙基-β-D硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达,经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定。结果重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后证实构建成功;SDS-PAGE结果显示表达产物为相对分子质量36KD的融合蛋白,Western印迹检测纯化后蛋白显示特异性条带。结论成功构建了pET-32a-Eppin重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Eppin蛋白,为进一步研究其生物学活性及免疫性避孕效应奠定了基础。
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