端粒酶反转录功能区基因的表达和纯化

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【摘要】

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通过PCR技术扩增出hTRT的目的片段,克隆至表达载体pET28-b中并转化至BL21(DE3),经IPTG诱导后在52 kDa处发现有外源基因的表达,密度扫描显示表达蛋白含量为20%.目标蛋白以包含

【作者】

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程希远庞建新吴曙光兰和魁任大明

【机构】

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上海浦东郭守敬路189号国家科药筛选中心,第一军医大学药物研究所,复旦大学生命科学院

【出处】

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遗传

【发表日期】

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2002年6期

【关键词】

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端粒酶反转录功能区基因表达纯化 pET载体亲和层析 hTRT resever transcriptase motif pET vector affini

【基金项目】

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国家自然科学基金

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通过PCR技术扩增出hTRT的目的片段,克隆至表达载体pET28-b中并转化至BL21(DE3),经IPTG诱导后在52 kDa处发现有外源基因的表达,密度扫描显示表达蛋白含量为20%.目标蛋白以包含体形式存在,含8mol/L尿素和10mmol/L DTT的裂解缓冲液溶解的包含体采用金属螯合层析有效分离出目标蛋白.免疫印迹实验表明:诱导出的融合蛋白是端粒酶反转录功能区基因所编码的蛋白质.

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