bcr/abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定

来源 :临床医药实践 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liangweiyu123
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目的:构建bcr/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/abl mRNA和P210蛋白的影响。方法:根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tusch 1设计原则,选择设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅱ启动子H1的真核表达载体pTER117,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT—PCR分析b
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