【摘 要】
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目的 研究let-7b和miR-199a对黑色素瘤增殖生长的影响.方法 设计靶向let-7b和miR-199a基因的过表达质粒和inhibitor干扰片段,将同一株系B16F10细胞分为七组:空白组、let-7b质
【基金项目】
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国家自然科学基金;中南大学杰青培育专项基金;湘雅三医院125人才基金;湖南省自然科学基金;湖南省卫生厅科研项目
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目的 研究let-7b和miR-199a对黑色素瘤增殖生长的影响.方法 设计靶向let-7b和miR-199a基因的过表达质粒和inhibitor干扰片段,将同一株系B16F10细胞分为七组:空白组、let-7b质粒组、miR-199a质粒组、空质粒组、let-7b inhibitor组、miR-199a inhibitor组、inhibitor对照组,运用基因转染技术将对应组别的外源基因导入B16F10细胞中,从RNA水平、蛋白水平和细胞水平三方面检测let-7b和miR-199a基因对B16F10细胞的影响.结果 let-7b质粒组和miR-199a质粒组B16F10细胞中对应基因的表达为3.8776±0.1372和2.8660±0.2821,明显高于空白组(P＜0.05);let-7b inhibitor组和miR-199a inhibitor组B16F10细胞中对应基因的表达为0.2057±0.0263和0.2656±0.0253,明显低于空白组(P＜0.05);B16F10细胞中cyclinD1的表达let-7b质粒组(2.023±0.315)和let-7b inhibitor组(1.857±0.377)明显高于空白组(0.997±0.041)(P＜0.05),而B16F10细胞中Met的表达中miR-199a质粒组(5.19±0.309)和miR-199a inhibitor组(4.87±0.044)明显高于空白组(2.2±0.198)(P＜0.05);let-7b质粒组和miR-199a质粒组B16F10细胞的生长趋势较空白组缓慢,尤其到转染后第3天,此生长趋势下降至最低值(P＜0.05),此后又缓慢趋近正常;此外,let-7b质粒组和miR-199a质粒组B16F10细胞凋亡率分别为(11.8±1.19)%和(11.3±1.59)%,明显高于空白组(5.77±1.74)%(P＜0.05).结论 let-7b和miR-199a可负调控黑色素瘤细胞的增殖生长.
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