【摘 要】
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目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)是否为T细胞因子4(TCF4)的靶基因,参与调控结直肠癌细胞Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路.方法 构建CTGF启动子质粒pGL3-CTGF,联合TCF4显性负性突变体表达质粒pcDNA3-dnTCF4,转染结肠癌细胞株SW480,双荧光素酶实验分析CTGF启动子转录活性,染色质免疫共沉淀(ChIP)法验证CTGF启动子区与TCF4的相互作用.结
【机 构】
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510180广州医学院附属广州市第一人民医院胃肠外科,510180广州医学院附属广州市第一人民医院胃肠外科,510180广州医学院附属广州市第一人民医院胃肠外科,510180广州医学院附属广州市第一人
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目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)是否为T细胞因子4(TCF4)的靶基因,参与调控结直肠癌细胞Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路.方法 构建CTGF启动子质粒pGL3-CTGF,联合TCF4显性负性突变体表达质粒pcDNA3-dnTCF4,转染结肠癌细胞株SW480,双荧光素酶实验分析CTGF启动子转录活性,染色质免疫共沉淀(ChIP)法验证CTGF启动子区与TCF4的相互作用.结果 SW480转染pGL3-CTGF质粒后荧光素酶活性(0.78±0.04)显著高于对照组转染空白质粒(0.01±0.00)(P＜0.01)；同时转染阻断β-catenin/TCF4信号通路的pcDNA3-dnTCF4质粒和pGL3-CTGF质粒,SW480细胞的荧光素酶活性(0.26±0.03)比单纯转染pGL3-CTGF质粒显著下降(P＜0.05).ChIP-聚合酶链反应(PCR)证实CTGF为TCF4的直接作用靶基因.结论 CTGF是β-catenin-TCF4信号通路的下游靶基因,TCF4直接结合于CTGF启动子区。
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