【摘 要】
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为与腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因构建融合基因表达载体,利用健康绵羊血扩增和克隆了设计有特殊酶切位点的绵羊白细胞介素2(OviIL -2).从绵羊血中分离白细胞,用TRIZOL试剂盒
【机 构】
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中国农业科学院特产研究所,解放军军需大学
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为与腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因构建融合基因表达载体,利用健康绵羊血扩增和克隆了设计有特殊酶切位点的绵羊白细胞介素2(OviIL -2).从绵羊血中分离白细胞,用TRIZOL试剂盒提取绵羊白细胞RNA,以RNA为模板,用设计的OviIL-2 3′引物进行RT-PCR,扩增OviIL-2 cDNA;以OviIL-2 cDNA为模板,用OviIL -2的5′引物和3′引物进行PCR,扩增设计有BamHⅠ和EcoRⅠ限制性酶切位点的OviIL-2. 经1.5%琼脂糖凝胶电泳分析和XbaⅠ酶切鉴定PCR产物后,将OviIL-2 PCR产物与质粒pBlues cript SK(+)连接,进行OviIL-2基因克隆,在含X-gal和IPTG的LB平板上,挑选白色单一菌落进行重组质粒筛选,用BamHⅠ+EcoRⅠ或EcoRⅤ酶切提取重组质粒,琼脂糖凝胶电泳出现1条500 bp大小的带;用EcoRⅠ或EcoRⅤ+XbaⅠ,BamHⅠ+XbaⅠ酶切重组质粒分别出现270 bp和230 bp大小的带,从而筛选出重组质粒pBlue-OviIL-2.将筛选出的pBlue-OviIL-2 进行序列分析,证明克隆的OviIL-2基因与国外报告的基因一致.
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